J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y L i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g e f f i c i e n c y o f f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e K e y w o r d s : L i g n o l y t i c a c t i v i t y , p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n , z o n e f o r m a t i o n , A r e c a n u t h u s k w a s t e , F u n g i . A B S T R A C T : A w i d e r a n g e o f m i c r o o r g a n i s m s a r e c a p a b l e o f d e g r a d i n g l i g n i n p r e s e n t i n t h e A r e c a n u t h u s k w a s t e f o r t h e i r g r o w t h . T h e p r e s e n t s t u d y h a s b e e n u n d e r t a k e n t o i s o l a t e l i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g f u n g i f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . I s o l a t i o n o f f u n g i b y u s i n g s e r i a l d i l u t i o n m e t h o d a n d d i r e c t s o i l p l a t e m e t h o d w a s e m p l o y e d . E s t i m a t i o n o f l i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i n g e f f i c i e n c y o f i s o l a t e d f u n g i w a s c a r r i e d o u t . F i f t e e n v a r i e t i e s o f f u n g a l s p e c i e s w e r e i s o l a t e d f r o m t h e A r e c a n u t h u s k w a s t e . O f t h e s e f i f t e e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d s e v e n s h o w e d l i g n o l y t i c p r o p e r t y a n d n i n e s h o w e d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y . T h e l i g n o l y t i c a b i l i t y s h o w s t h a t t h e z o n e o f c l e a r a n c e w a s h i g h e r i n G i b b e r e l l a f u j i k u r o i ( 0 . 8 ± 0 . 0 2 c m s ) , m e d i u m i n A s p e r g i l l u s n i g e r ( s t r a i n - 1 ) ( 0 . 6 ± 0 . 0 6 c m s ) a n d v e r y l o w a c t i v i t y i n A s p e r g i l l u s f l a v u s ( 0 . 2 ± 0 . 0 2 c m s ) . T h e P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t y s h o w s t h a t t h e z o n e o f c l e a r a n c e w a s h i g h e r i n A s p e r g i l l u s t e r r e u s ( 0 . 8 ± 0 . 0 3 c m s ) , m e d i u m i n B o t r y t i s c i n e r e a ( 0 . 5 ± 0 . 0 8 c m s ) a n d v e r y l o w a c t i v i t y i n A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) a n d U n i d e n t i f i e d - 3 ( 0 . 1 ± 0 . 0 3 c m s ) . T h e P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y w a s h i g h e r i n U n i d e n t i f i e d - 2 ( 5 5 0 ± 8 . 5 0 µ g / m l ) , m e d i u m i n U n i d e n t i f i e d - 1 ( 5 3 0 ± 1 0 . 0 0 µ g / m l ) a n d v e r y l o w a c t i v i t y i n A s p e r g i l l u s n i g e r ( s t r a i n - 2 ) ( 4 0 ± 2 . 5 2 µ g / m l ) . T o t a l b i o m a s s y i e l d o f t h e f u n g i s h o w e d t h e h i g h e s t r a t e o f g r o w t h f o r A s p e r g i l l u s n i g e r ( s t r a i n - 1 ) ( 0 . 3 1 ± 0 . 0 2 g m / d a y s ) , m e d i u m g r o w t h r a t e i n u n i d e n t i f i e d - 2 ( 0 . 2 9 ± 0 . 0 1 g m / d a y s ) a n d v e r y l o w g r o w t h r a t e i n u n i d e n t i f i e d - 1 ( 0 . 0 6 ± 0 . 0 1 g m / d a y s ) i n t w e l v e d a y s i n c u b a t i o n . A n e f f e c t i v e f u n g a l S p e c i e s i s v e r y e s s e n t i a l f o r t h e d e g r a d a t i o n o f l i g n o c e l l u l o s i c w a s t e s a n d m u n i c i p a l s o l i d w a s t e s . 1 4 3 - 1 5 1 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 2 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : N a v e e n k u m a r K J , T h i p p e s w a m y B , S h i v a k u m a r P . B a n a k a r a n d T h i r u m a l e s h B V . I n s t i t u t i o n : D e p t . o f P . G . S t u d i e s a n d R e s e a r c h i n M i c r o b i o l o g y , B i o s c i e n c e C o m p l e x , K u v e m p u U n i v e r s i t y , J n a n a S a h y a d r i , S h a n k a r a g h a t t a - 5 7 7 4 5 1 , S h i v a m o g g a d i s t r i c t , K a r n a t a k a , I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : T h i p p e s w a m y B . E m a i l : t h i p p e s w a m y b 2 0 5 @ g m a i l . c o m . P h o n e N o : + 9 1 9 9 8 6 9 1 7 0 3 9 F a x : 0 8 2 8 2 - 2 5 6 2 6 2 W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 8 1 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 5 J a n 2 0 1 2 / A c c e p t e d : 1 5 J a n 2 0 1 2 / P u b l i s h e d : 2 9 F e b 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : N a v e e n k u m a r K J , T h i p p e s w a m y B , S h i v a k u m a r P . B a n a k a r a n d T h i r u m a l e s h B V . L i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g e f f i c i e n c y o f f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h

I N T R O D U C T I O N L i g n i n s a r e t h e m a j o r c o m p o n e n t s i n a g r i c u l t u r e w a s t e s , w o o d c h i p s , m u n i c i p a l s o l i d w a s t e a n d A r e c a n u t h u s k w a s t e . L i g n i n i s a h i g h l y c o m p l e x b i o p o l y m e r o f p h e n y l p r o p a n o i d s t r u c t u r e s w i t h v a r i o u s c a r b o n - c a r b o n a n d e t h e r l i n k a g e s b e t w e e n m o n o m e r i c u n i t s ( N a z a r e t h a n d M a v i n k u r v e , 1 9 8 7 ) . L i g n o c e l l u l o s e i s a c o m p l e x s u b s t r a t e a n d i t s b i o d e g r a d a t i o n i s n o t d e p e n d e n t o n e n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n s a l o n e , b u t i t a l s o h a s t h e d e g r a d a t i v e c a p a c i t y o f t h e m i c r o b i a l p o p u l a t i o n ( W a l d r o p e t a l . , 2 0 0 0 ; M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . L i g n o c e l l u l o s e b i o d e g r a d a t i o n i s e s s e n t i a l l y a r a c e b e t w e e n c e l l u l o s e a n d l i g n i n d e g r a d a t i o n ( R e i d , 1 9 8 9 ; M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . T h i s c o n t e s t i s e v e n m o r e e x t e n s i v e a n d c o m p l e x i n n a t u r e . F u n g i w i t h r e s t r i c t e d m e t a b o l i c c a p a b i l i t i e s d e v e l o p m u t u a l i s t i c r e l a t i o n s h i p s a n d d e g r a d i n g c e l l u l o s e , l i g n i n e t c . ( R a y n e r a n d B o d d y , 1 9 8 8 ; M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . M o s t f u n g i a r e c a p a b l e o f c e l l u l o s e d e g r a d e r s a n d f u n g i p r o d u c e a c t i v e p o l y m e r d e g r a d i n g e n z y m e s , i n c l u d i n g c e l l u l a s e s a n d x y l a n a s e s ( H o d r o v a e t a l . , 1 9 9 8 ; M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . T h e i r c e l l u l a s e s a r e a m o n g t h e m o s t a c t i v e r e p o r t e d t o d a t e a n d a b l e t o s o l u b i l i s e b o t h a m o r p h o u s a n d c r y s t a l l i n e c e l l u l o s e ( W u b a h e t a l . , 1 9 9 3 ; M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . T h e e x t r a c e l l u l a r e n z y m e s o f s o m e w h i t e r o t f u n g i a r e a b l e t o d e g r a d e l i g n i n e x t e n s i v e l y ( R a o , 1 9 9 3 ; S e l v a m e t a l . , 2 0 1 1 ) . T h e l i g n i n o l y t i c e n z y m e s a r e d i r e c t l y i n v o l v e d i n t h e d e g r a d a t i o n o f v a r i o u s x e n o b i o t i c c o m p o u n d s , i n c l u d i n g i n d u s t r i a l d y e s a n d p o l y c y c l i c a r o m a t i c h y d r o c a r b o n s ( M e t u k u e t a l . , 2 0 1 1 ; B e n n e t e t a l . , 2 0 0 2 ) . L i g n o c e l l u l o s e b i o d e g r a d a t i o n b y p r o k a r y o t e s i s e s s e n t i a l l y a s l o w p r o c e s s c h a r a c t e r i z e d b y t h e l a c k o f p o w e r f u l l i g n o c e l l u l o s e d e g r a d i n g e n z y m e s , e s p e c i a l l y l i g n i n p e r o x i d a s e s . T h e r e f o r e , l i g n o c e l l u l o s e b i o d e g r a d a t i o n b y p r o k a r y o t e s i s o f e c o l o g i c a l s i g n i f i c a n c e , b u t l i g n i n b i o d e g r a d a t i o n b y f u n g i , e s p e c i a l l y w h i t e - r o t f u n g i i s o f c o m m e r c i a l i m p o r t a n c e ( B e n n e t e t a l . , 2 0 0 2 ) . T h e c o m p l e x i t y o f t h e l i g n i n s t r u c t u r e r e n d e r s i t f a i r l y r e s i s t a n t t o m i c r o b i a l a t t a c k a n d i t s d e g r a d a t i o n i s t h e r a t e d e t e r m i n i n g s t e p i n b i o d e t e r i o r a t i o n a n d b i o c o n v e r s i o n p r o c e s s f o r t h e u t i l i z a t i o n o f l i g n o c e l l u l o s i c f i b e r ( M a l h e r b e a n d C l o e t , 2 0 0 2 ) . A n u m b e r o f m i c r o o r g a n i s m s u t i l i z e l i g n i n a s c a r b o n s o u r c e f o r t h e i r g r o w t h . M i c r o b i o l o g i c a l w o r k i s c a r r i e d o u t o n A r e c a n u t h u s k w a s t e f o r b i o d e g r a d a t i o n a n d t o i n c r e a s e t h e m a n o r i a l v a l u e o f t h e c o m p o s t u s i n g m i c r o b e s ( S a x e n a a n d J o s h i , 2 0 0 2 ; S h a r m a e t a l . , 1 9 9 1 ) . S o i l m i c r o b e s h a v e t h e a b i l i t y t o c o n v e r t f i x e d f o r m o f p h o s p h o r u s t o s o l u b l e f o r m s t h a t c a n b e e a s i l y t a k e n u p b y p l a n t s s p e c i e s o f A s p e r g i l l u s a n d P e n c i l l i u m , w h o s e f u n g a l i s o l a t e s i d e n t i f i e d t o h a v e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g c a p a b i l i t i e s ( Y a d a v e t a l . , 2 0 1 1 ) . F i l a m e n t o u s f u n g i a r e w i d e l y u s e d a s p r o d u c e r s o f o r g a n i c a c i d s a n d i n p a r t i c u l a r A s p e r g i l l u s n i g e r a n d P e n i c i l l i u m s p e c i e s h a v e b e e n t e s t e d i n f e r m e n t a t i o n s y s t e m o r i n o c u l a t e d d i r e c t l y i n t o s o i l i n o r d e r t o s o l u b i l i z e r o c k p h o s p h a t e ( Y a d a v e t a l . , 2 0 1 1 ) . H e n c e , t h e l i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f t h e m i c r o o r g a n i s m s h a s g r e a t e c o n o m i c i m p o r t a n c e . A c c o r d i n g t o R o s e ( 1 9 5 7 ) t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f f u n g i m a y b e a t t r i b u t e d t o t h e a c i d s p r o d u c e d b y t h e m . T h e e f f i c i e n c y o f b i o l o g i c a l t r a n s f o r m a t i o n o f p h o s p h o r u s d e p e n d s o n t h e r a t i o o f o r g a n i c m a t t e r t o p h o s p h o r u s . A s a r e s u l t o f t h e t r a n s f o r m a t i o n , s o l u b l e p h o s p h a t e s a r e d e r i v e d f r o m i n s o l u b l e T r i C a l c i u m P h o s p h a t e ( T C P ) i n c a l c a r e o u s a n d a l k a l i n e s o i l s . T h e t r a n s f o r m a t i o n o f i n s o l u b l e p h o s p h a t e i n t o s o l u b l e f o r m i s c a r r i e d o u t b y a n u m b e r o f m i c r o b e s p r e s e n t i n t h e s o i l . A l a r g e f r a c t i o n o f s o i l m i c r o b e s c a n d i s s o l v e i n s o l u b l e i n o r g a n i c p h o s p h a t e s p r e s e n t i n t h e s o i l a n d m a k e t h e m a v a i l a b l e t o t h e p l a n t s . P u r e i n s o l u b l e i n o r g a n i c p h o s p h a t e s l i k e T r i C a l c i u m P h o s p h a t e ( T C P ) h a v e b e e n u s e d f o r s c r e e n i n g o r g a n i s m s f o r p h o s p h o r u s s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y ( P r a d h a n a n d S u k l a , 2 0 0 5 ) . T h e u s e o f a n e c o n o m i c a l l y c h e a p p h o s p h a t e s o u r c e a n d p r o p e r l y s e l e c t e d s o l u b i l i z i n g f u n g i c a n h e l p r e p l a c i n g t h e c u r r e n t l y u s e d c o s t l y p h o s p h a t i c f e r t i l i z e r s . T h e a i m o f t h e s t u d y w a s t o i n v e s t i g a t e t h e i s o l a t i o n , i d e n t i f i c a t i o n a n d 1 4 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2

c h a r a c t e r i z a t i o n o f l i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g f u n g i f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S I s o l a t i o n o f F u n g i b y s e r i a l d i l u t i o n m e t h o d O n e g r a m o f A r e c a n u t h u s k w a s t e p o w d e r w a s t a k e n i n a c o n i c a l f l a s k c o n t a i n i n g n i n e m i l l i l i t e r s o f s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r a n d s h a k e n w e l l i n v o r t e x m i x e r f o r 3 0 m i n u t e s . F r o m t h i s s t o c k , v a r i o u s d i l u t i o n s w e r e p r e p a r e d f r o m 1 0 - 1 t o 1 0 - 7 , u s i n g s t e r i l e d i s t i l l e d w a t e r . O n e m i l l i l i t e r s o f t h e d i l u t e d s a m p l e w a s p o u r e d i n t o P e t r i p l a t e s c o n t a i n i n g t h e M a r t i n R o s e B e n g a l a g a r m e d i u m a n d P o t a t o D e x t r o s e a g a r ( P D A ) m e d i u m . D i s t i n c t f u n g a l c o l o n i e s g r o w n i n M a r t i n R o s e B e n g a l a g a r m e d i u m a n d P o t a t o d e x t r o s e a g a r m e d i u m w e r e i s o l a t e d f r o m r e p e a t e d p l a t i n g . A l l t h e i s o l a t e s w e r e p u r e c u l t u r e d , i d e n t i f i e d a n d s t u d i e d f o r l i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y . T h e f u n g a l c o l o n i e s w e r e i d e n t i f i e d b a s e d o n t h e i r c u l t u r a l c h a r a c t e r i s t i c s a n d s t r u c t u r e o f t h e i r c o n i d i o p h o r e ( P a u l a n d D a n i e l , 2 0 0 7 ; A n e j a , 2 0 0 1 ; N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 1 ) . I s o l a t i o n o f F u n g i b y D i r e c t s o i l p l a t e ( W a r c u p s o i l p l a t e ) m e t h o d A r e c a n u t h u s k w a s t e p o w d e r w a s c o l l e c t e d i n s t e r i l i z e d p o l y t h e n e b a g . T h e n , 0 . 1 5 g o f s o i l s a m p l e w a s a d d e d t o s t e r i l e p l a t e s w i t h t h e h e l p o f a s t e r i l i z e d c o o l e d l o o p o r t r a n s f e r n e e d l e . T h e n , 1 5 - 2 0 m l o f m e l t e d , c o o l e d ( 4 5 ° C ) s a b o u r a u d a g a r m e d i a w a s a d d e d , s u p p l e m e n t e d w i t h s t r e p t o p e n i c i l l i n a n d r o s e B e n g a l , t o e a c h s o i l i n o c u l a t e d P e t r i p l a t e . D i s p e n s e t h e s o i l p a r t i c l e s t h r o u g h o u t t h e m e d i u m b y g e n t l e r o t a t i o n o f t h e P e t r i d i s h e s a n d a l l o w e d t h e p l a t e s t o s o l i d i f y . P l a t e s w e r e i n c u b a t e d a t r o o m t e m p e r a t u r e ( 2 8 ° C ) i n a n i n v e r t e d p o s i t i o n f o r 1 5 d a y s . F u n g a l m o r p h o l o g y w a s s t u d i e d m a c r o s c o p i c a l l y b y o b s e r v i n g c o l o n y f e a t u r e s ( c o l o u r a n d s u r f a c e s ) a n d m i c r o s c o p i c a l l y b y s t a i n i n g w i t h l a c t o p h e n o l c o t t o n b l u e a n d o b s e r v e u n d e r c o m p o u n d m i c r o s c o p e f o r t h e c o n i d i a , c o n i d i o p h o r e s a n d a r r a n g e m e n t o f s p o r e s ( A n e j a , 2 0 0 1 ; B a r n e t t , 1 9 7 5 ; B o o t h , 1 9 7 1 ; D o m s c h e t a l . , 1 9 8 0 ; F u n d a r , 1 9 6 1 ; S u b r a m a n i a n , 1 9 8 3 ; N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 1 ) . L i g n o l y t i c a c t i v i t y F i f t e e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e w e r e s c r e e n e d f o r l i g n o l y t i c a c t i v i t y b y t h e m e t h o d d e s c r i b e d b y ( P a u l a n d D a n i e l , 2 0 0 7 ) . T h e n , 1 . 5 p e r c e n t o f m a l t e x t r a c t a n d 2 p e r c e n t a g a r w e r e d i s s o l v e d i n 8 5 0 m l o f w a t e r i n a f l a s k . T h e n , 0 . 5 p e r c e n t o f t a n n i c a c i d w a s d i s s o l v e d i n 1 5 0 m l d i s t i l l e d w a t e r i n a n o t h e r f l a s k . T h e s e f l a s k s w e r e s t e r i l i z e d a t 1 2 1 0 C f o r 1 5 m i n u t e s . T h e s o l u t i o n s i n t w o f l a s k s w e r e m i x e d j u s t b e f o r e p o u r i n g t h e m i n t o p l a t e s . A f t e r s o l i d i f i c a t i o n , t h e p l a t e s w e r e s e p a r a t e l y i n o c u l a t e d w i t h t h e f i f t e e n f u n g a l i s o l a t e s a n d i n c u b a t e d a t r o o m t e m p e r a t u r e f o r s i x d a y s . T h e d i a m e t e r o f t h e c o l o n y a n d t h e b r o w n z o n e d e v e l o p e d a r o u n d t h e c o l o n y w e r e e x a m i n e d a n d m e a s u r e d ( P a u l a n d D a n i e l , 2 0 0 7 ) . P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y P r i m a r y s c r e e n i n g F u n g i i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e w e r e p l a t e d i n P i k o v s k a y a s m e d i u m c o n t a i n i n g 2 5 0 m g o f T r i C a l c i u m P h o s p h a t e ( T C P ) t h e P O 4 s o u r c e t o s c r e e n t h e e f f i c a c y o f p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n . T h e p l a t e s w e r e i n c u b a t e d f o r f i v e d a y s . T h e z o n e s o f c l e a r i n g a r o u n d t h e m i c r o b i a l c o l o n i e s i n d i c a t e d t h e e x t e n t o f p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n . W h i c h w a s m e a s u r e d a n d b a s e d o n t h e f o r m a t i o n o f t h e z o n e o f c l e a r a n c e , n i n e f u n g a l s p e c i e s w e r e s e l e c t e d a m o n g t h e m f o r f u r t h e r p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n t e s t s ( R o s e , 1 9 5 7 ; J a c k s o n , 1 9 7 3 ) . Q u a n t i t a t i v e m e a s u r e m e n t o f p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n T h e e f f i c a c i e s o f t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l c u l t u r e s i n t h e s o l u b i l i z a t i o n o f i n s o l u b l e p h o s p h a t e s ( T C P ) w e r e d e t e r m i n e d . T h e s e c u l t u r e s w e r e g r o w n i n 1 0 0 m l o f P i k o v s k a y a s l i q u i d m e d i u m c o n t a i n i n g 2 5 0 m g o f T C P a s t h e p h o s p h a t e s o u r c e f o r 1 2 d a y s a t 2 8 ± 2 0 C i n a s h a k e r . E v e r y t h r e e d a y s t h e s a m p l e w a s t a k e n a n d f i l t e r e d u s i n g W h a t m a n N o . 1 f i l t e r p a p e r . T h e b i o m a s s o f J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 1 4 5 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2

1 4 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 t h e f u n g u s w a s m e a s u r e d o n d r y w e i g h t b a s i s a n d t h e p H o f t h e f i l t r a t e w a s m e a s u r e d w i t h a d i g i t a l p H m e t e r . F r o m f i l t r a t e , t h e p h o s p h a t e w a s m e a s u r e d b y t h e m e t h o d o f J a c k s o n ( A n e j a , 2 0 0 1 ; S a d a s i v a m a n d M a n i c k a m , 1 9 9 7 ; S e l v i e t a l . , 2 0 1 1 ) . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N I n t h i s s t u d y , t h e i s o l a t i o n a n d s c r e e n i n g o f A r e c a n u t h u s k d e g r a d i n g f i f t e e n f u n g a l s p e c i e s w e r e r e c o r d e d . T h e r e s u l t s o f t h e l i g n o l y t i c a c t i v i t y o f t h e f i f t e e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m t h e A r e c a n u t h u s k w a s t e i s g i v e n i n t a b l e - 1 . A s i n d i c a t e d i n t h e t a b l e , f o u r f u n g a l i s o l a t e s , i . e . , A s p e r g i l l u s c l a v a t u s , A s p e r g i l l u s w e n t i i , P e n i c i l l i u m s p . , U n i d e n t i f i e d - 3 , d i d n o t s h o w a n y z o n e o f c l e a r a n c e a n d a l s o m y c e l l i a l g r o w t h . A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s s h o w e d m y c e l l i a l g r o w t h o f 4 . 6 ± 0 . 1 0 c m s , B o t r y t i s c i n e r e a s h o w e d m y c e l l i a l g r o w t h o f 0 . 8 ± 0 . 1 0 c m s , G i b b e r e l l a a v e n a c e a s h o w e d m y c e l l i a l g r o w t h o f 1 . 1 ± 0 . 1 0 c m s a n d U n i d e n t i f i e d - 1 s h o w e d m y c e l l i a l g r o w t h o f 0 . 9 ± 0 . 0 6 c m s , b u t d i d n o t s h o w a z o n e o f c l e a r a n c e . T h e o t h e r s e v e n f u n g a l i s o l a t e s , n a m e l y A s p e r g i l l u s t e r r e u s , A s p e r g i l l u s f l a v u s , A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) , A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) , G i b b e r e l l a f u j i k u r o i , U n i d e n t i f i e d - 2 a n d F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m s h o w e d a z o n e o f c l e a r a n c e a s w e l l a s m y c e l l i a l g r o w t h . L i g n i n a n d t a n n i c a c i d a r e c l o s e l y r e l a t e d s u b s t a n c e s a n d t h e r e f o r e e v i d e n c e f o r t a n n i c a c i d d e g r a d a t i o n c a n b e t a k e n f o r l i g n i n d e g r a d a t i o n ( G a r c i a e t a l . , 2 0 0 7 ) . T a n n i c a c i d d e g r a d a t i o n w a s s h o w n b y t h e f o r m a t i o n o f a b r o w n z o n e a r o u n d t h e f u n g a l c o l o n y ( T a b l e - 1 ) ( F i g - 1 ) . T h e r e s u l t s o f t h e p r i m a r y s c r e e n i n g o f t h e f i f t e e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m t h e A r e c a n u t h u s k w a s t e f o r p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t y i s g i v e n i n t a b l e - 2 . O n l y f o u r t e e n o u t o f f i f t e e n s p e c i e s s h o w e d m y c e l l i a l g r o w t h a n d s i x s p e c i e s o u t o f t h e s e f o u r t e e n , v i z , F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m , P e n i c i l l i u m s p , A s p e r g i l l u s c l a v a t u s , A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s , G i b b e r e l l a a v e n a c e a a n d A s p e r g i l l u s w e n t i i d i d n o t s h o w a z o n e o f c l e a r a n c e . H e n c e t h e n i n e s p e c i e s , i . e . A s p e r g i l l u s t e r r e u s , G i b b e r e l l a f u j i k u r o i , B o t r y t i s c i n e r e a , A s p e r g i l l u s f l a v u s , A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) , A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) , N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) A s p e r g i l l u s f l a v u s F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m G i b b e r e l l a f u j i k u r o i A s p e r g i l l u s t e r r u s U n i d e n t i f i e d - 2 0 . 2 0 . 3 0 . 4 0 . 5 0 . 6 0 . 7 0 . 8 Z o n e o f C l e a r a n c e i n c m F i g u r e : 1 . L i g n o l y t i c a c t i v i t y o b s e r v e d d u r i n g t h e s e l e c t e d s e v e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . S l . N o . N a m e o f t h e o r g a n i s m s M y c e l i a l g r o w t h ( c m ) Z o n e o f c l e a r a n c e ( c m ) T o t a l d i a m e t e r ( c m ) 1 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) 8 . 1 ± 0 . 1 0 0 . 6 ± 0 . 0 6 1 6 . 3 ± 0 . 1 8 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) 4 . 3 ± 0 . 0 6 0 . 3 ± 0 . 0 4 8 . 6 ± 0 . 0 2 3 B o t r y t i s c i n e r e a 0 . 8 ± 0 . 1 0 - 1 . 6 ± 0 . 0 7 4 P e n i c i l l i u m s p - - - 5 A s p e r g i l l u s f l a v u s 2 . 4 ± 0 . 2 5 0 . 2 ± 0 . 0 2 4 . 8 ± 0 . 0 9 6 A s p e r g i l l u s w e n t t i - - - 7 F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m 5 . 2 ± 0 . 0 9 0 . 4 ± 0 . 0 3 1 0 . 5 ± 0 . 1 0 8 A s p e r g i l l u s c l a v a t u s - - - 9 G i b b e r e l l a f u j i k u r o i 6 . 1 ± 0 . 1 0 0 . 8 ± 0 . 0 2 1 2 . 3 ± 0 . 0 1 1 0 A s p e r g i l l u s t e r r u s 4 . 6 ± 0 . 1 0 0 . 5 ± 0 . 0 1 9 . 3 ± 0 . 0 3 1 1 G i b b e r e l l a a v e n a c e a 1 . 1 ± 0 . 1 0 - 2 . 3 ± 0 . 0 2 1 2 A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s 2 . 3 ± 0 . 2 0 - 4 . 6 ± 0 . 1 0 1 3 U n i d e n t i f i e d - 1 0 . 9 ± 0 . 0 6 1 . 8 ± 0 . 0 1 1 4 U n i d e n t i f i e d - 2 3 . 6 ± 0 . 2 0 0 . 3 ± 0 . 0 2 7 . 3 ± 0 . 1 0 1 5 U n i d e n t i f i e d - 3 - - - T a b l e : 1 . L i g n o l y t i c a c t i v i t y o f t h e s e l e c t e d f i f t e e n f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e .

u n i d e n t i f i e d - 1 , u n i d e n t i f i e d - 2 a n d u n i d e n t i f i e d - 3 . T h i s s h o w e d a z o n e o f c l e a r a n c e o f 0 . 1 ± 0 . 0 6 t o 0 . 8 ± 0 . 0 3 c m s w e r e s e l e c t e d a n d f u r t h e r t e s t e d f o r p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y . T h e z o n e o f c l e a r a n c e w a s h i g h i n A s p e r g i l l u s t e r r e u s a n d w a s f o r m e d d u e t o t h e s o l u b i l i z a t i o n o f i n s o l u b l e p h o s p h a t e s b y a c i d i f i c a t i o n a s s o c i a t e d w i t h e i t h e r p r o t o n e x t r u s i o n o r o r g a n i c a c i d s e c r e t i o n ( B a r d i y a a n d G a u r , 1 9 7 4 ; D a r m a l e t a l . , 1 9 8 9 ; Y a d a v e t a l . , 2 0 1 1 ) ( T a b l e - 2 ) ( F i g - 2 ) . T h e r e s u l t s o f t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l i s o l a t e s t e s t e d f o r p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y i s g i v e n i n t a b l e - 3 . A s i n d i c a t e d i n t h i s t a b l e , t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y i n c r e a s e d w i t h t h e i n c r e a s e i n t h e n u m b e r o f c u l t u r e d a y s b u t , a f t e r r e a c h i n g a m a x i m u m , t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y s l o w l y d e c r e a s e d f o r a l l t h e n i n e f u n g a l i s o l a t e s t e s t e d . T h e n u m b e r o f d a y s t a k e n f o r t h e m a x i m u m a c t i v i t y v a r i e d f o r v a r i o u s s p e c i e s ( G u p t a e t a l . , 2 0 1 0 ) . I n 3 r d d a y A s p e r g i l l u s t e r r e u s a n d B o t r y t i s c i n e r e a s h o w e d h i g h p h o s p h a t e s o l u b i l i n g a c t i v i t y . I n 6 t h d a y A s p e r g i l l u s n i g e r ( s t r a i n - 1 ) , B o t r y t i s c i n e r e a , A s p e r g i l l u s f l a v u s , G i b b e r e l l a f u j i k u r o i , U n i d e n t i f i e d - 1 a n d U n i d e n t i f i e d - 2 s h o w e d h i g h p h o s p h a t e s o l u b i l i n g a c t i v i t y . I n 9 t h d a y U n i d e n t i f i e d - 3 a n d B o t r y t i s c i n e r e a s h o w e d h i g h p h o s p h a t e s o l u b i l i n g a c t i v i t y . T h e s o l u b i l i z a t i o n o f p h o s p h a t e s i n a l i q u i d m e d i u m d e p e n d s o n t h e n a t u r e o f t h e p h o s p h a t e s o u r c e , t h e o r g a n i c i n c u b a t i o n p e r i o d a n d t h e n a t u r e a n d q u a n t i t y o f t h e o r g a n i c a c i d s s e c r e t e d i n t o t h e m e d i u m ( S u j a t h a e t a l . , 2 0 0 4 ; S h a r m a e t a l . , 2 0 1 1 ; R o s e , 1 9 5 7 ) . T h e n u m b e r o f d a y s t a k e n f o r t h e m a x i m u m a c t i v i t y v a r i e d f o r v a r i o u s s p e c i e s ( K a p r i a n d T e w a r i , 2 0 1 0 ; V a s s i l e v e t a l . , 1 9 9 5 ) ( T a b l e - 3 ) ( F i g - 3 ) . F o u r t e e n d a y s o f i n c u b a t i o n p e r i o d w a s f a v o r a b l e f o r m a x i m u m p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n b y m i c r o o r g a n i s m s i n a l i q u i d m e d i u m . N a r s i a n e t a l . , ( 1 9 9 5 ) o b s e r v e d t h a t t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f A s p e r g i l l u s a c u l e a t u s w a s t h e h i g h e s t a f t e r 4 8 h o f f u n g a l g r o w t h a n d t h a t t h e f u n g a l b i o m a s s p r o d u c t i o n w a s m o r e i n t h e c a s e o f T r i C a l c i u m P h o s p h a t e t h a n o t h e r J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 1 4 7 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2 S l . N o . N a m e o f t h e o r g a n i s m s M y c e l i a l g r o w t h ( c m ) Z o n e o f c l e a r a n c e ( c m ) T o t a l d i a m e t e r ( c m ) 1 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) 1 . 2 ± 0 . 1 0 0 . 2 ± 0 . 1 0 2 . 4 ± 0 . 0 5 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) 1 . 2 ± 0 . 0 6 0 . 1 ± 0 . 0 6 2 . 4 ± 0 . 0 2 3 B o t r y t i s c i n e r e a 1 . 3 ± 0 . 1 3 0 . 5 ± 0 . 0 8 2 . 7 5 ± 0 . 0 3 4 A s p e r g i l l u s t e r r u s 1 . 6 ± 0 . 1 0 0 . 8 ± 0 . 0 3 3 . 3 3 ± 0 . 0 2 5 A s p e r g i l l u s f l a v u s 1 . 4 ± 0 . 0 6 0 . 3 ± 0 . 0 3 2 . 9 5 ± 0 . 2 4 6 G i b b e r e l l a f u j i k u r o i 1 . 3 ± 0 . 0 1 0 . 2 ± 0 . 0 1 2 . 6 ± 0 . 0 9 7 F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m 2 . 3 ± 0 . 0 7 - 4 . 6 5 ± 0 . 0 3 8 A s p e r g i l l u s c l a v a t u s 6 . 2 ± 0 . 1 0 - 1 2 . 5 ± 0 . 2 6 9 A s p e r g i l l u s w e n t t i 2 . 7 ± 0 . 0 5 - 5 . 4 5 ± 0 . 1 5 1 0 P e n i c i l l i u m s p . 4 . 7 ± 0 . 1 2 - 9 . 5 ± 0 . 2 8 1 1 G i b b e r e l l a a v e n a c e a 1 . 3 ± 0 . 1 0 - 2 . 7 5 ± 0 . 0 5 1 2 A s p e r g i l l u s f u m i g a t u s 4 . 8 ± 0 . 0 6 - 9 . 7 ± 0 . 1 3 1 3 U n i d e n t i f i e d - 1 1 . 6 ± 0 . 1 9 0 . 4 ± 0 . 0 1 3 . 2 ± 0 . 1 0 1 4 U n i d e n t i f i e d - 2 2 . 0 ± 0 . 1 2 0 . 3 ± 0 . 0 2 4 . 1 5 ± 0 . 0 7 1 5 U n i d e n t i f i e d - 3 1 . 5 ± 0 . 1 5 0 . 1 ± 0 . 0 3 3 . 1 5 ± 0 . 1 0 T a b l e : 2 . P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t y o f t h e s e l e c t e d f i f t e e n f u n g a l S p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e i n P i k o v s k a y a s s o l i d m e d i u m . A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) B o t r y t i s c i n e r e a A s p e r g i l l u s t e r r u s A s p e r g i l l u s f l a v u s G i b b e r e l l a f u j i k u r o i U n i d e n t i f i e d - 1 U n i d e n t i f i e d - 2 U n i d e n t i f i e d - 3 - - 0 . 0 0 . 1 0 . 2 0 . 3 0 . 4 0 . 5 0 . 6 0 . 7 0 . 8 0 . 9 Z o n e o f C l e a r a n c e i n c m F i g u r e : 2 . P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t y o b s e r v e d d u r i n g t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e .

p h o s p h a t e s o u r c e s . T h e p H v a r i a t i o n s o b s e r v e d i n t h e a l l n i n e s e l e c t e d f u n g a l s p e c i e s d u r i n g t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y f o r a p e r i o d o f 1 2 d a y s . A l l t h e n i n e i s o l a t e s s h o w e d a d e c r e a s e i n t h e p H d u r i n g t h e i n i t i a l d a y s ( 0 t o 3 d a y s ) a n d t h e n i t i n c r e a s e d o r r e m a i n e d a t t h e s a m e l e v e l d u r i n g 3 t o 6 d a y s t h e r e a f t e r . T h e r e w a s n o t m u c h c h a n g e i n t h e p H v a l u e s u p t o t h e p r o d u c t i o n o f o r g a n i c a c i d s l i k e c i t r i c a c i d , a c e t i c a c i d , f u m a r i c a c i d a n d m a l i c a c i d d u r i n g g r o w t h . T h e m e c h a n i s m s u s e d b y m i c r o o r g a n i s m s f o r i n o r g a n i c p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n h a v e b e e n a t t r i b u t e d m a i n l y t o a c i d i f i c a t i o n , c h e l a t i o n a n d e x c h a n g e r e a c t i o n s i n g r o w t h e n v i r o n m e n t ( M o l l a a n d C h o w d h u r y , 1 9 8 4 ; N o p p a r a t e t a l . , 2 0 0 7 ; C u n n i n g h a m a n d K u i a c k , 1 9 9 2 ) ( T a b l e - 4 ) ( F i g - 4 ) . C O N C L U S I O N T h i s s t u d y c o n c l u d e d t h a t l i g n o l y t i c a c t i v i t y a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g e f f i c i e n c y o f f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . F e w f u n g a l s p e c i e s s h o w e d l i g n o l y t i c a c t i v i t y , i t s a b i l i t y f o r l i g n i n d e g r a d a t i o n a n d u t i l i z a t i o n o f l i g n i n a s a c a r b o n s o u r c e f o r t h e i r g r o w t h . F e w f u n g a l s p e c i e s s h o w e d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a b i l i t y a n d u t i l i z a t i o n o f P h o s p h a t e a s a c a r b o n s o u r c e f o r t h e i r g r o w t h . I n f u t u r e f u n g a l s p e c i e s a r e h i g h l y e f f e c t i v e a n d v e r y e s s e n t i a l f o r t h e d e g r a d a t i o n o f l i g n o c e l l u l o s i c w a s t e s a n d m u n i c i p a l s o l i d w a s t e s . 1 4 8 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2 S l . N o . N a m e o f t h e o r g a n i s m s P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y ( u g / m l ) B i o m a s s y i e l d ( g m / d ) 3 r d d a y 6 t h d a y 9 t h d a y 1 2 t h d a y 1 5 t h d a y 1 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) 1 1 0 ± 5 . 0 0 2 8 0 ± 7 . 6 4 2 0 0 ± 2 . 5 2 0 . 3 1 ± 0 . 0 2 0 . 0 3 ± 0 . 0 0 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) 4 0 ± 2 . 5 2 6 0 ± 3 . 6 1 1 9 0 ± 7 . 0 9 0 . 2 8 ± 0 . 0 1 0 . 0 5 ± 0 . 0 0 3 B o t r y t i s c i n e r e a 4 1 0 ± 6 . 8 1 4 5 0 ± 1 . 5 3 3 3 0 ± 2 . 5 2 0 . 1 3 ± 0 . 0 2 0 . 0 3 ± 0 . 0 0 4 A s p e r g i l l u s t e r r u s 4 3 0 ± 1 3 . 2 3 3 1 0 ± 5 . 5 1 2 1 0 ± 3 . 0 0 0 . 2 1 ± 0 . 0 3 0 . 0 1 ± 0 . 0 0 5 A s p e r g i l l u s f l a v u s 3 7 0 ± 2 0 . 2 1 4 8 0 ± 5 . 5 1 2 6 0 ± 4 . 0 4 0 . 1 1 ± 0 . 0 2 0 . 0 2 ± 0 . 0 0 6 G i b b e r e l l a f u j i k u r o i 2 2 0 ± 9 . 8 5 5 1 0 ± 6 . 0 3 1 7 0 ± 2 . 5 2 0 . 0 8 ± 0 . 0 2 0 . 0 2 ± 0 . 0 0 7 U n i d e n t i f i e d - 1 1 0 0 ± 7 . 6 4 5 3 0 ± 1 0 . 0 0 1 2 0 ± 2 . 0 8 0 . 0 6 ± 0 . 0 1 0 . 0 3 ± 0 . 0 0 8 U n i d e n t i f i e d - 2 1 2 0 ± 1 3 . 6 5 5 5 0 ± 8 . 5 0 2 9 0 ± 2 . 5 2 0 . 2 9 ± 0 . 0 1 0 . 0 4 ± 0 . 0 0 9 U n i d e n t i f i e d - 3 1 9 0 ± 5 . 0 0 2 5 0 ± 4 . 0 4 4 2 0 ± 1 . 5 3 0 . 0 8 ± 0 . 0 5 0 . 0 4 ± 0 . 0 0 T a b l e : 3 . P h o s p h a t e S o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e i n P i k o v s k a y a s b r o t h . S l . N o . N a m e o f t h e o r g a n i s m s p H V a l u e s ( N u m b e r o f d a y s ) 3 r d d a y 6 t h d a y 9 t h d a y 1 2 t h d a y 1 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) 2 . 9 0 ± 0 . 0 6 3 . 0 2 ± 0 . 0 1 3 . 2 1 ± 0 . 0 3 3 . 4 1 ± 0 . 0 2 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) 3 . 3 2 ± 0 . 0 1 3 . 2 0 ± 1 . 6 2 3 . 2 9 ± 0 . 0 3 3 . 1 9 ± 0 . 0 2 3 B o t r y t i s c i n e r e a 3 . 1 1 ± 0 . 0 2 3 . 0 9 ± 0 . 0 2 3 . 0 2 ± 0 . 0 2 2 . 9 7 ± 0 . 0 1 4 A s p e r g i l l u s t e r r u s 3 . 0 1 ± 0 . 0 1 3 . 1 5 ± 0 . 0 1 2 . 9 7 ± 0 . 0 1 2 . 8 5 ± 0 . 0 3 5 A s p e r g i l l u s f l a v u s 3 . 4 3 ± 0 . 0 2 3 . 4 3 ± 0 . 0 2 3 . 1 2 ± 0 . 0 2 3 . 0 3 ± 0 . 0 3 6 G i b b e r e l l a f u j i k u r o i 3 . 1 6 ± 0 . 0 1 3 . 4 7 ± 0 . 0 1 3 . 5 3 ± 0 . 0 2 3 . 6 1 ± 0 . 0 3 7 U n i d e n t i f i e d - 1 3 . 6 3 ± 0 . 0 2 4 . 1 8 ± 0 . 0 1 3 . 9 8 ± 0 . 0 2 3 . 6 3 ± 0 . 0 3 8 U n i d e n t i f i e d - 2 3 . 8 3 ± 0 . 0 2 3 . 8 7 ± 0 . 0 2 3 . 9 4 ± 0 . 0 3 3 . 7 8 ± 0 . 0 1 9 U n i d e n t i f i e d - 3 3 . 3 4 ± 0 . 0 1 3 . 6 0 ± 0 . 1 0 3 . 5 1 ± . 0 3 3 . 4 3 ± 0 . 0 1 T a b l e : 4 . p H v a r i a t i o n o b s e r v e d d u r i n g t h e p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) B o t r y t i s c i n e r e a A s p e r g i l l u s t e r r u s A s p e r g i l l u s f l a v u s G i b b e r e l l a f u j i k u r o i U n i d e n t i f i e d - 1 U n i d e n t i f i e d - 2 U n i d e n t i f i e d - 3 - - 0 1 0 0 2 0 0 3 0 0 4 0 0 5 0 0 6 0 0 P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y ( u g / m l ) 3 r d d a y a c t i v i t y 6 t h d a y a c t i v i t y 9 t h d a y a c t i v i t y F i g u r e : 3 . P h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o b s e r v e d d u r i n g t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e .

A C K N O W L E D G E M E N T W e s i n c e r e l y a c k n o w l e d g e t h e D e p a r t m e n t o f M i c r o b i o l o g y , K u v e m p u U n i v e r s i t y , S h i v a m o g g a , a n d K a r n a t a k a f o r p r o v i d i n g o v e r a l l s u p p o r t d u r i n g t h e f i e l d w o r k , f i n a n c i a l s u p p o r t a n d p r o v i d i n g n e c e s s a r y f a c i l i t i e s . R E F E R E N C E S A n e j a K R . 2 0 0 1 . E x p e r i m e n t s i n M i c r o b i o l o g y , P l a n t P a t h o l o g y a n d B i o t e c h n o l o g y . N e w a g e i n t e r n a t i o n a l p u b l i s h e r s 4 : 1 5 7 - 1 6 2 . B a r n e t t H L . 1 9 7 5 . I l l u s t r a t e d g e n e r a o f i m p e r f e c t f u n g i 2 : 1 - 2 2 5 . B e n n e t J W , W u n c h K G a n d F a i s o n B D . 2 0 0 2 . M a n u a l o f E n v i r o n m e n t a l M i c r o b i o l o g y . A S M P r e s s W a s h i n g t o n , D . C . l - 2 : 9 6 0 - 9 7 1 . B o o t h C . 1 9 7 1 . I l l u s t r a t e d t h e g e n u s F u s a r i u m . C o m m o n W e a l t h M y c o l o g i c a l I n s t i t u t e 1 - 2 3 7 . B a r d i y a M C a n d G a u r A C . 1 9 7 4 . I s o l a t i o n a n d s c r e e n i n g o f m i c r o o r g a n i s m s d i s s o l v i n g l o w - g r a d e r o c k p h o s p h a t e . F o l i a M i c r o b i o . , 1 9 : 3 8 6 - 3 8 9 . C u n n i n g h a m J E a n d K u i a c k C . 1 9 9 2 . P r o d u c t i o n o f c i t r i c a n d o x a l i c a c i d s a n d s o l u b i l i z a t i o n o f c a l c i u m p h o s p h a t e b y P e n c i l l i u m b i l a i c . A p p l i e d a n d E n v i r o n m e n t a l M i c r o b i o l o g y 5 8 : 1 4 5 1 - 1 4 5 8 . D a r m a l N S , S i n g h R B a n d R a i R . 1 9 8 9 . I s o l a t i o n o f p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n f r o m d i f f e r e n t s o u r c e s . C u r r . S c i . , 5 8 : 5 7 0 - 5 7 1 . D o m s c h K H , G a m e s W a n d A n d e r s o n T H . 1 9 8 0 . C o m p e n d i u m o f s o i l F u n g i . A c a d e m i c p r e s s , L o n d o n . 1 : 1 - 8 5 8 . F u n d e r S . 1 9 6 1 . P r a c t i c a l m y c o l o g y m a n u a l f o r i d e n t i f i c a t i o n o f f u n g i . A . W . B r o g g e r s B o k t r y k k a r i A / S , N o r w a y . 1 - 1 2 0 . G a r c i a M C V , E s t r e l l a F S , L o p e z M L a n d M o r e n o J . 2 0 0 7 . I n v i t r o s t u d i e s o n l i g n o c e l l u l o s e d e g r a d a t i o n b y m i c r o b i a l s t r a i n s i s o l a t e d f r o m c o m p o s t i n g p r o c e s s . I n t e r n a t i o n a l b i o d e t e r i o r a t i o n a n d b i o d e g r a d a t i o n 5 9 : 3 2 2 - 3 2 8 . G u p t a N , D a s S a n d B a s a k U C . 2 0 1 0 . T C P a n d r o c k p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n b y m a n g r o v e f u n g i . J o u r n a l o f A g r i c u l t u r a l T e c h n o l o g y 6 ( 3 ) : 4 2 1 - 4 2 8 . g r o w n u n d e r d i f f e r e n t p H a n d t e m p e r a t u r e i n l i q u i d c u l t u r e . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 1 4 9 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2 A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 1 ) A s p e r g i l l u s n i g e r ( S t r a i n - 2 ) B o t r y t i s c i n e r e a A s p e r g i l l u s t e r r u s A s p e r g i l l u s f l a v u s G i b b e r e l l a f u j i k u r o i U n i d e n t i f i e d - 1 U n i d e n t i f i e d - 2 U n i d e n t i f i e d - 3 - - 2 . 8 3 . 0 3 . 2 3 . 4 3 . 6 3 . 8 4 . 0 4 . 2 p H V a l u e s 3 r d d a y p H 6 t h d a y p H 9 t h d a y p H 1 2 t h d a y p H F i g u r e : 4 . p H v a r i a t i o n o b s e r v e d d u r i n g t h e h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g a c t i v i t y o f t h e s e l e c t e d n i n e f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m A r e c a n u t h u s k w a s t e . F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m P e n i c i l l i u m s p A s p e r g i l l u s n i g e r F i g u r e : 5 . P h o t o g r a p h s o f f u n g a l s t r a i n s s u c h a s F u s a r i u m c h l a m y d o s p o r u m , P e n i c i l l i u m s p a n d A s p e r g i l l u s n i g e r .

H o d r o v a B , K o p e c n y J a n d K a s J . 1 9 9 8 . C e l l u l o l y t i c e n z y m e s o f r u m e n a n a e r o b i c f u n g i O r p i n o m y c e s j o y o n i i a n d C a e c o m y c e s c o m m u n i s . R e s . M i c r o b i o l . , 1 4 9 : 4 1 7 - 4 2 7 . J a c k s o n M L . 1 9 7 3 . S o i l C h e m i c a l A n a l y s i s . P r e n t i c e h a l l o f I n d i a n P v t . L t d . , N e w D e l h i . 4 9 8 . P a u l J J A a n d D a n i e l T . 2 0 0 7 . L i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g e f f i c i e n c y o f f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m M u n i c i p a l s o l i d w a s t e . A s i a n J r . o f M i c r o b i o l . B i o t e c h . E n v . S c . , 9 ( 4 ) : 8 3 7 - 8 4 0 . K a p r i A a n d T e w a r i L . 2 0 1 0 . P h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n p o t e n t i a l a n d p h o s p h a t e a c t i v i t y o f r h i z o s p h e r i c T r i c h o d e r m a s p . B r a z i l i a n J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y 4 1 ( 3 ) : 1 - 9 . M a l h e r b e S a n d C l o e t e T E . 2 0 0 2 . L i g n o c e l l u l o s e b i o d e g r a d a t i o n : F u n d a m e n t a l s a n d a p p l i c a t i o n s . R e v i e w s i n E n v i r o n m e n t a l S c i e n c e a n d B i o t e c h n o l o g y 1 ( 2 ) : 1 0 5 - 1 1 4 . M o l l a M A Z a n d C h o w d h u r y A A . 1 9 8 4 . M i c r o b i a l m i n e r a l i z a t i o n o f o r g a n i c p h o s p h a t e s i n s o i l . P l a n t a n d S o i l 7 8 : 3 9 3 - 3 9 9 . M e t u k u R P , B u r r a S , N i d a d a v o l u , H i m a b i n d u , P a b b a S a n d S i n g a r a c h a r y a M A . 2 0 1 1 . S e l e c t i o n o f h i g h e s t l i g n o l y t i c w h i t e r o t f u n g u s a n d i t s m o l e c u l a r i d e n t i f i c a t i o n . J o u r n a l o f c e l l a n d t i s s u e r e s e a r c h 1 1 ( 1 ) : 2 5 5 7 - 2 5 6 2 . N a v e e n k u m a r K J , T h i p p e s w a m y B , T h i r u m a l e s h B V , P r a d e e p a K a n d V e n k a t e s h . 2 0 1 1 . C o m p a r a t i v e S t u d y o f F u n g a l D i v e r s i t y i n t h e A g r i c u l t u r a l s o i l a n d N o n - a g r i c u l t u r a l s o i l o f B h a d r a v a t h i t a l u k , S h i m o g a d i s t r i c t , K a r n a t a k a , I n d i a . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y 2 : 1 2 9 - 1 3 4 . N a z a r e t h S a n d M a v i n k u r v e S . 1 9 8 7 . I s o l a t i o n o f P o t e n t i a l L i g n o l y t i c O r g a n i s m s . J o u r n a l o f I n t e r n a t i o n a l B i o d e t e r i o r a t i o n 2 3 : 2 7 1 - 2 8 0 . N a r s i a n V , T h a k k a r J a n d P a t e l H H . 1 9 9 5 . M i n e r a l p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n b y A s p e r g i l l u s a c u l e a t u s . I n d i a n J o u r n a l o f m i c r o b i o l o g y 3 7 : 4 3 - 4 4 . N o p p a r a t C , J a t u p o r n p i p a t M a n d R i t t i b o o n A . 2 0 0 7 . I s o l a t i o n o f p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g f u n g i i n s o i l f r o m k a n c h a n a b u r i , T h a i l a n d . K M I T L S c i . T e c h . J . , 7 : 1 3 7 - 1 4 6 . P r a d h a n N a n d S u k l a L B . 2 0 0 5 . S o l u b i l i z a t i o n o f i n o r g a n i c p h o s p h a t e s b y f u n g i i s o l a t e d f r o m A g r i c u l t u r a l s o i l . A f r i c a n J o u r n a l o f B i o t e c h n o l o g y 5 ( 1 0 ) : 8 5 0 - 8 5 4 . P a u l J J A a n d D a n i e l T . 2 0 0 7 . L i g n o l y t i c a n d p h o s p h a t e s o l u b i l i z i n g e f f i c i e n c y o f f u n g a l s p e c i e s i s o l a t e d f r o m M u n i c i p a l s o l i d w a s t e . A s i a n J r . o f M i c r o b i o l . B i o t e c h . E n v . S c . , 9 ( 4 ) : 8 3 7 - 8 4 0 . R a o N S . 1 9 9 3 . O r g a n i c m a t t e r a n d c o m p o s t i n g . I n : B i o f e r t i l i z e r s i n A g r i c u l t u r e a n d F o r e s t r y . I I I r d E d i t i o n , O x f o r d a n d I B H P u b . C o . N e w D e l h i . 1 5 7 - 1 5 9 . R a y n e r A D M a n d B o d d y L . 1 9 8 8 . F u n g a l c o m m u n i t i e s i n t h e d e c a y o f w o o d . A d v . M i c r o b . E c o l . , 1 0 : 1 1 5 - 1 6 6 . R e i d I D . 1 9 8 9 . S o l i d - s t a t e f e r m e n t a t i o n s f o r b i o l o g i c a l d e l i g n i f i c a t i o n . E n z y m e . M i c r o b . T e c h n o l . , 1 1 : 7 8 6 - 8 0 2 . R o s e R E . 1 9 5 7 . T e c h n i q u e f o r d e t e r m i n i n g t h e e f f e c t o f m i c r o o r g a n i s m s o n i n s o l u b l e i n o r g a n i c p h o s p h a t e s . J o u r n a l o f S o i l a n d F e r t . 2 9 - 3 2 5 . S a x e n a P a n d J o s h i N . 2 0 0 2 . O r g a n i c w a s t e d e c o m p o s i t i o n b y u s i n g M u c o r s p s . A n d P e n c i l l i u m s p s . I n c o m b i n a t i o n . I n d i a n J . E n v i r o n a n d E c o p l a n . , 6 ( 3 ) : 5 8 3 - 5 8 6 . S e l v a m G G , B a s k a r a n R a n d M o h a n P M . 2 0 1 1 . M i c r o b i a l d i v e r s i t y a n d b i o r e m e d i a t i o n o f d i s t i l l e r i e s e f f l u e n t . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y 3 : 1 5 3 - 1 6 2 . S e l v i K B , P a u l J J A , R a v i n d r a n A D a n d V i j a y a V . 2 0 1 1 . Q u a n t i t a t i v e e s t i m a t i o n o f i n s o l u b l e i n o r g a n i c 1 5 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2

p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n . I n t e r n a t i o n a l J o u r n a l o f s c i e n c e a n d N a t u r e 2 ( 2 ) : 2 9 2 - 2 9 5 . S a d a s i v a m S a n d M a n i c k a m A . 1 9 9 7 . B i o c h e m i c a l m e t h o d s . S e c o n d e d i t i o n . N e w a g e i n t e r n a t i o n a l l i m i t e d p u b l i s h e r s 2 : 1 - 2 0 . S h a r m a S H S , G i l m a r e C a n d S h a r m a H B . 1 9 9 1 . C o m p a r i s o n o f c h e m i c a l c o m p o n e n t s o f h e a l t h y a n d s p o i l e d a r e c a n u t . J o u r n a l o f P l a n t P a t h o l o g . , 9 5 : 7 4 7 - 7 5 1 . S u b r a m a n i a n C V . 1 9 8 3 . H y p h o m y c e t e s t a x o n o m y a n d b i o l o g y . A c a d e m i c P r e s s , L o n d o n . 1 - 2 : 1 - 9 3 0 . S u j a t h a E , G i r i s h a m S a n d R e d d y S M . 2 0 0 4 . P h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n b y t h e r m o p h i l i c m i c r o o r g a n i s m s . I n d i a n J o u r n a l o f m i c r o b i o l o g y 4 4 ( 2 ) : 1 0 1 - 1 0 4 . S h a r m a S , K u m a r V a n d T r i p a t h i R B . 2 0 1 1 . I s o l a t i o n o f p h o s p h a t e S o l u b i l i z i n g m i c r o o r g a n i s m s f r o m s o i l . J o u r n a l o f m i c r o b i o l o g y a n d B i o t e c h n o l o g y R e s e a r c h 1 ( 2 ) : 9 0 - 9 5 . V a s s i l e v N , B a c a M T , V a s s i l e v a M , F r a n c o I a n d A z e o n R . 1 9 9 5 . R o c k p h o s p h a t e s o l u b i l i z a t i o n b y A s p e r g i l l u s n i g e r g r o w n o n s u g a r - b e e t w a s t e m e d i u m . A p p l M i c r o b i o l B i o t e c h n o l . , 4 4 : 5 4 6 - 5 4 9 . W a l d r o p M P , B a l s e r T C a n d F i r e s t o n e M K . 2 0 0 0 . L i n k i n g m i c r o b i a l c o m m u n i t y c o m p o s i t i o n t o f u n c t i o n i n a t r o p i c a l s o i l . S o i l b i o l o g y a n d b i o c h e m i s t r y 3 2 : 1 8 3 7 - 1 8 4 6 . W u b a h D A , A k i n D E a n d B o r n e m a n W S . 1 9 9 3 . B i o l o g y , f i b e r - d e g r a d a t i o n , a n d e n z y m o l o g y o f a n a e r o b i c z o o s p o r i c f u n g i . C r i t . R e v . M i c r o b i o l . , 1 9 : 9 9 - 1 1 5 . Y a d a v J , V e r m a J P a n d T i w a r i K N . 2 0 1 1 . S o l u b i l i z a t i o n o f T r i c a c i u m P h o s p h a t e b y f u n g u s A s p e r g i l l u s n i g e r a t d i f f e r e n t C a r b o n S o u r c e a n d S a l i n i t y . T r e n d s i n A p p l i e d S c i e n c e R e s e a r c h 6 ( 6 ) : 6 0 6 - 6 1 3 . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 : 1 4 3 - 1 5 1 1 5 1 N a v e e n k u m a r e t a l . , 2 0 1 2 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t F i c u s p u b l i s h e r s . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g O p e n A c c e s s a n d Q u i c k s p r e a d i n g Y o u r e t a i n s y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m / s u b m i t 1 . a s p x .