J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n h a t c h i n g s u c c e s s a n d s u r v i v a l o f e a r l y l i f e s t a g e s i n t h e e c o n o m i c a l l y c a n d i d a t e m a r i n e m o l l u s k s : S p o t t e d b a b y l o n B a b y l o n i a a r e o l a t a K e y w o r d s : S p o t t e d b a b y l o n , B a b y l o n i a a r e o l a t a , t e m p e r a t u r e , s a l i n i t y , h a t c h i n g , s u r v i v a l . A B S T R A C T : T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e h a t c h i n g s u c c e s s a n d l a r v a l a n d j u v e n i l e s u r v i v a l o f t h e s p o t t e d b a b y l o n B a b y l o n i a a r e o l a t a w e r e i n v e s t i g a t e d i n a 3 x 3 c o m p l e t e f a c t o r i a l e x p e r i m e n t a l d e s i g n e m p l o y i n g t h r e e t e m p e r a t u r e s ( 2 5 , 3 0 a n d 3 5 0 C ) a n d t h r e e s a l i n i t i e s ( 2 7 , 3 0 a n d 3 3 ) . T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a w a s o n l y s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y s a l i n i t y b u t n o t f o r t e m p e r a t u r e . N o s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s o c c u r r e d . H o w e v e r , s u r v i v a l o f l a r v a e a n d e a r l y j u v e n i l e w e r e s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t . T h e h i g h e s t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e s w a s f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) . F r o m a n a q u a c u l t u r e p o i n t o f v i e w , h i g h h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 . A s w e l l a s t h e h i g h s u r v i v a l o f l a r v a e w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 0 . 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 a n d 2 9 - 3 5 0 C a n d 3 2 - 3 3 f o r e a r l y j u v e n i l e s . 3 7 6 - 3 8 4 | J R B | 2 0 1 1 | V o l 1 | N o 5 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : N i l n a j C h a i t a n a w i s u t i , S i r i n u n N u n i m a n d W a n n a n e e S a n t h a w e e s u k . I n s t i t u t i o n : A q u a t i c R e s o u r c e s R e s e a r c h I n s t i t u t e , C h u l a l o n g k o r n U n i v e r s i t y , P h y a T h a i R o a d , B a n g k o k , T h a i l a n d 1 0 3 3 0 . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : N i l n a j C h a i t a n a w i s u t i E m a i l : n i l n a j c 1 @ h o t m a i l . c o m , s a e n i s a 4 7 9 @ h o t m a i l . c o m , w a n n a n e e 2 9 5 @ h o t m a i l . c o m . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 0 7 9 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 1 1 A u g 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 7 A u g 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 2 3 S e p 2 0 1 1 A r t i c l e C i t a t i o n : N i l n a j C h a i t a n a w i s u t i , S i r i n u n N u n i m a n d W a n n a n e e S a n t h a w e e s u k . T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n h a t c h i n g s u c c e s s a n d s u r v i v a l o f e a r l y l i f e s t a g e s i n t h e e c o n o m i c a l l y c a n d i d a t e m a r i n e m o l l u s k s : S p o t t e d b a b y l o n B a b y l o n i a a r e o l a t a J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N : T e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y a r e c o n s i d e r e d t o b e t h e m o s t i m p o r t a n t p h y s i c a l f a c t o r s i n f l u e n c i n g m a r i n e o r g a n i s m s , a n d t h e b i o l o g i c a l e f f e c t s o f t h e s e f a c t o r s a r e c o m p l e x a n d w i d e r a n g i n g . T e m p e r a t u r e i s o n e o f t h e m o s t c r i t i c a l e x t e r n a l f a c t o r s o f o n t o g e n y i n t h e e a r l y l i f e s t a g e s o f f i s h . T h e r e a r e t w o w a y s i n w h i c h t e m p e r a t u r e a f f e c t s o n t o g e n y . F i r s t l y , t e m p e r a t u r e , i f w i t h i n a v i a b l e r a n g e , s t r o n g l y a f f e c t s t h e r a t e o f o n t o g e n y . A t e m p e r a t u r e b e y o n d t h i s r a n g e i s l e t h a l f o r t h e s p e c i e s . S e c o n d l y , t e m p e r a t u r e a f f e c t s t h e h a t c h r a t e , i n c u b a t i o n p e r i o d , t h e s i z e o f t h e n e w l y h a t c h e d l a r v a e , l a r v a l y o l k a b s o r p t i o n a n d u t i l i z a t i o n , l a r v a l f e e d i n g b e h a v i o r , l a r v a l s u r v i v a l a n d l a r v a l g r o w t h ( S h i e t a l . 2 0 1 0 ) . T o l e r a n c e a n d r e s i s t a n c e t e s t s c a n b e u s e d t o d e t e r m i n e t h e s u r v i v a l c a p a c i t y o f v a r i o u s l i f e s t a g e s o f a s p e c i e s i n r e l a t i o n t o c e r t a i n f a c t o r s . T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l o f m a r i n e a n i m a l s h a v e b e e n d e m o n s t r a t e d i n m a n y m a r i n e o r g a n i s m s , m a i n l y f i s h ( S h i e t a l . 2 0 1 0 , B e r l i n s k y e t a l . 2 0 0 4 , C o o k e t a l . 2 0 0 5 ) , c r u s t a c e a n s ( D a w i r s 1 9 7 9 , P o n c e - P a l a f o x e t a l . 1 9 9 7 , M e n e e t a l . 1 9 9 1 , N a g a r a j 1 9 8 8 , A l b u q u e r q u e e t a l . 2 0 0 9 ) , e c h i n o d e r m s ( A s h a & M u t h i a h 2 0 0 5 , D o n g & D o n g 2 0 0 6 , J i e t a l . 2 0 0 8 , L a v i t r a e t a l . 2 0 1 0 ) , b i v a l v e s ( T a y l o r e t a l . 2 0 0 4 , R o b e r t e t a l . 1 9 8 8 , T e t t e l b a c h e t a l . 1 9 8 1 ) , a n d g a s t r o p o d s ( L u e t a l . 2 0 0 4 , D a v i s 2 0 0 0 , C h e n & C h e n 2 0 0 4 , Z h e n g e t a l . 2 0 0 0 ) . H o w e v e r , t h e r e i s s c a n t i n f o r m a t i o n o n t h e e f f e c t s o f e n v i r o n m e n t a l f l u c t u a t i o n , s u c h a s t e m p e r a t u r e , s a l i n i t y o n g r o w t h a n d s u r v i v a l o f B a b y l o n i a a r e o l a t a p a r t i c u l a r l y t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . T h i s i s t h e c a s e f o r e a r l y l i f e s t a g e o f B a b y l o n i a a r e o l a t a t h a t m a y b e m o r e s e n s i t i v e t o e n v i r o n m e n t a l c h a n g e . A l b u q u e r q u e e t a l . ( 2 0 0 9 ) s t a t e d t h a t s a l i n i t y c o u l d m o d i f y t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d a l t e r t h e t e m p e r a t u r e r a n g e o f m a n y b i o l o g i c a l p r o c e s s e s . I n t u r n , t e m p e r a t u r e c a n a l s o m o d i f y t h e e f f e c t s o f s a l i n i t y . T h e o b j e c t i v e o f t h i s s t u d y i s t o i n v e s t i g a t e t h e c o m b i n e d e f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e e g g s , l a r v a e a n d e a r l y j u v e n i l e o f s p o t t e d B a b y l o n B a b y l o n i a a r e o l a t a t o d e t e r m i n e t h e o p t i m a l t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y f o r i n c u b a t i o n a n d l a r v a l c u l t u r e o f t h i s s p e c i e s . T h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y w i l l b e u s e f u l i n i n c r e a s i n g t h e p r o d u c t i o n o f t h i s s p e c i e s t h r o u g h i n c u b a t i o n a n d l a r v a l c u l t u r e . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S E x p e r i m e n t a l d e s i g n T h e s t u d y w a s c o n d u c t e d f r o m F e b r u a r y t o A p r i l 2 0 1 1 i n i n d o o r a i r c o n d i t i o n r o o m a t S i c h a n g M a r i n e S c i e n c e R e s e a r c h a n d T r a i n i n g S t a t i o n , C h u l a l o n g k o r n U n i v e r s i t y , l o c a t e d o n S i c h a n g I s l a n d C h o l b u r i p r o v i n c e , T h a i l a n d . T o v e r i f y t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n v a r i o u s l i f e s t a g e s o f t h e s p o t t e d b a b y l o n r e s i s t a n c e , a 3 x 3 c o m p l e t e f a c t o r i a l d e s i g n w a s u s e d f o r t h e e x p e r i m e n t s i n c l u d i n g t h r e e t e m p e r a t u r e s ( 2 5 , 3 0 a n d 3 5 0 C ) a n d t h r e e s a l i n i t i e s ( 2 7 , 3 0 a n d 3 3 ) . E a c h o f t h e n i n e d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n s w a s c o n d u c t e d i n t h r e e r e p l i c a t e s . A t o t a l o f 2 7 e x p e r i m e n t a l u n i t s w e r e s e t u p i n i t i a l l y . T h e e x p e r i m e n t f o l l o w e d a c o m p l e t e l y r a n d o m i z e d d e s i g n , u s i n g t h e e g g c a p s u l e , l a r v a e a n d j u v e n i l e s f r o m a s i n g l e s p a w n t o m i n i m i z e v a r i a b i l i t y b e t w e e n e x p e r i m e n t a l u n i t s . T h i s e x p e r i m e n t w a s c o n d u c t e d i n t h e a i r c o n d i t i o n r o o m w i t h n o r m a l t e m p e r a t u r e c o n t r o l a t 2 5 0 C . S e a w a t e r u s e d i n a l l t r e a t m e n t s w a s f i l t e r e d ( 1 0 µ m ) a n d d e c h l o r i n a t e d f o r t w o d a y s b e f o r e u s e t o e n s u r e n o c h l o r i n e r e s i d u e . S e a w a t e r w i t h l o w s a l i n i t i e s w a s m a d e u p d a i l y b y d i l u t i n g a s o u r c e o f n a t u r a l s e a w a t e r w i t h d e - c h l o r i n a t e d f r e s h w a t e r a n d h i g h s a l i n i t i e s w a t e r w a s m a d e b y e v a p o r a t i n g s e a w a t e r . T e m p e r a t u r e w e r e m a i n t a i n e d w i t h i n + 0 . 2 0 C u s i n g 3 i d e n t i c a l 2 2 . 0 L t h e r m o s t a t i c a l l y c o n t r o l l e d w a t e r b a t h s ( L x W x H = 5 0 x 3 0 x 1 5 c m ) . E a c h w a t e r b a t h c o n t a i n e d n i n e e x p e r i m e n t a l u n i t s ( 1 0 0 0 m L g l a s s b e a k e r ) . G e n t l y a e r a t i o n w a s p r o v i d e d d u r i n g l a r v a l c u l t u r e , a n o r m a l p h o t o p e r i o d o f 1 2 L : 1 2 D w a s a d o p t e d t h r o u g h o u t t h e e x p e r i m e n t . W a t e r e x c h a n g e w a s n o t d o n e d u r i n g t h e e x p e r i m e n t f o r a l l a q u a r i a . S a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e i n a l l e x p e r i m e n t a l u n i t s w e r e m e a s u r e d e v e r y s i x h o u r s u s i n g a p o r t a b l e r e f r a c t o s a l i n o m e t e r a n d a m e r c u r y t h e r m o m e t e r , r e s p e c t i v e l y . A l l e x p e r i m e n t a l u n i t s w e r e c o v e r e d w i t h a l u m i n u m f o i l t o p r e v e n t e v a p o r a t i o n . T h e e x p e r i m e n t s l a s t e d a f t e r 9 6 h . E x p e r i m e n t 1 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e h a t c h i n g s u c c e s s A f t e r s p a w n i n g , t h e e g g c a p s u l e s w e r e t r a n s f e r r e d t o e x p e r i m e n t a l u n i t s m a i n t a i n e d a t d i f f e r e n t t e m p e r a t u r e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n s . T h e m e a n s i z e ( + S D ) o f e g g c a p s u l e s a t t h e s t a r t o f t h e e x p e r i m e n t w a s 1 . 2 + 0 . 0 3 c m i n l e n g t h . F o r e a c h t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y c o m b i n a t i o n , e a c h e x p e r i m e n t a l u n i t c o n s i s t e d o f 1 0 0 e g g c a p s u l e s a c c l i m a t e d i n a 1 0 0 0 m L g l a s s b e a k e r f i l l e d w i t h 7 0 0 m L s e a w a t e r . E a c h u n i t w a s s t o c k e d w i t h l o w s t o c k i n g d e n s i t y o f 1 0 e g g c a p s u l e s p e r u n i t s o t h a t s t o c k i n g d e n s i t y w a s n o t a l i m i t i n g f a c t o r f o r s u r v i v a l . H a t c h i n g o u t o f v e l i g e r l a r v a e f r o m e g g c a p s u l e u s u a l l y w a s o b s e r v e d b y n a k e d e y e s a n d 3 7 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1

c o n s i d e r e d a s h a t c h e d o r u n h a t c h e g g c a p s u l e . H a t c h e d e g g c a p s u l e s e x p r e s s e d b y n o f e r t i l i z e d e g g s i n s i d e o r p a r t i a l r e t a i n o f f e r t i l i z e d e g g s . T h e n u m b e r o f h a t c h e d c a p s u l e s a n d d u r a t i o n o f i n c u b a t i n g p e r i o d i n e a c h e x p e r i m e n t a l u n i t w e r e r e c o r d e d . T h e m e a n p e r c e n t a g e o f h a t c h i n g r a t e w a s c a l c u l a t e d b y c o m b i n i n g t h e d a t a f r o m t h r e e r e p l i c a t e s a t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t . E x p e r i m e n t 2 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l r a t e o f v e l i g e r l a r v a e W i t h i n 6 h a f t e r h a t c h i n g , a e r a t i o n w a s s t o p p e d , a n d t h e v e l i g e r l a r v a e w e r e a l l o w e d t o c o n c e n t r a t e a t t h e w a t e r s u r f a c e ; t h e y w e r e t h e n c o l l e c t e d f r o m t h e h a t c h i n g t a n k s f o r u s e i n t h e e x p e r i m e n t s . T h e m e a n s i z e ( + S D ) o f l a r v a e a t t h e s t a r t o f t h e e x p e r i m e n t w a s 4 2 8 + 0 . 0 1 µ m i n s h e l l l e n g t h . F o r e a c h t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y c o m b i n a t i o n , e a c h e x p e r i m e n t a l u n i t c o n s i s t e d o f 1 0 0 l a r v a e r e a r e d i n a 1 0 0 0 m L g l a s s b e a k e r f i l l e d w i t h 7 0 0 m L s e a w a t e r . E a c h u n i t w a s s t o c k e d w i t h l o w s t o c k i n g d e n s i t y o f 1 0 0 l a r v a e p e r u n i t s o t h a t s t o c k i n g d e n s i t y w a s n o t a l i m i t i n g f a c t o r f o r s u r v i v a l . L a r v a e w e r e f e d w i t h a s i n g l e a l g a l d i e t ( C h a e t o c e r o s c a l c i t r a n s ) o n c e d a i l y d u r i n g t h e e x p e r i m e n t . O p t i m a l c o n c e n t r a t i o n s o f a l g a l c e l l s ( 6 x 1 0 4 c e l l m l - 1 ) w e r e f e d s o t h a t f o o d a v a i l a b i l i t y w a s n o t a l i m i t i n g f a c t o r f o r s u r v i v a l a n d w a s a d j u s t e d f o r e a c h e x p e r i m e n t a c c o r d i n g t o t h e s i z e o f l a r v a e ( C h a i t a n a w i s u t i a n d K r i t s a n a p u n t u 1 9 9 7 ) . E a c h e x p e r i m e n t a l u n i t w a s i n i t i a l l y e x a m i n e d t h e d e a d l a r v a e a f t e r 6 h , a n d e v e r y 1 2 h t h e r e a f t e r . T h e n u m b e r o f l a r v a e w h i c h s i n k d o w n t o b o t t o m o f t h e a q u a r i a / e m p t y s h e l l o r n o m o v e m e n t o f v e l u m w e r e o b s e r v e d m i c r o s c o p i c a l l y a n d c o n s i d e r e d a s d e a d . T h e m e a n p e r c e n t a g e o f s u r v i v a l r a t e w a s c a l c u l a t e d b y c o m b i n i n g t h e d a t a f r o m t h r e e r e p l i c a t e s a t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t . E x p e r i m e n t 3 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l r a t e o f e a r l y j u v e n i l e s W i t h i n 4 8 h a f t e r s e t t l e m e n t , t h e m e a n s i z e ( + S D ) o f j u v e n i l e s w a s 1 3 9 3 . 3 3 + 8 . 1 8 µ m i n s h e l l l e n g t h a n d a r e u s e d a t t h e s t a r t o f t h e e x p e r i m e n t . F o r e a c h t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y c o m b i n a t i o n , e a c h e x p e r i m e n t a l u n i t ( 1 0 0 0 m L g l a s s b e a k e r f i l l e d w i t h 7 0 0 m L s e a w a t e r ) w a s s t o c k e d w i t h l o w s t o c k i n g d e n s i t y o f 5 0 l a r v a e p e r u n i t s o t h a t s t o c k i n g d e n s i t y w a s n o t a l i m i t i n g f a c t o r f o r s u r v i v a l . J u v e n i l e s w e r e f e d w i t h f r e s h m e a t o f t r a s h f i s h a t o n c e d a i l y d u r i n g t h e e x p e r i m e n t . U n e a t e n f o o d w a s r e m o v e d i m m e d i a t e l y a f t e r t h e y s t o p p e d e a t i n g t o p r e v e n t w a t e r d e g r a d a t i o n . T h e n t e s t e d j u v e n i l e s w e r e f e d s o t h a t f o o d a v a i l a b i l i t y w a s n o t a l i m i t i n g f a c t o r f o r s u r v i v a l . E a c h e x p e r i m e n t a l u n i t w a s i n i t i a l l y e x a m i n e d f o r t h e d e a d j u v e n i l e s a f t e r 6 h , a n d e v e r y 1 2 h t h e r e a f t e r . T h e n u m b e r o f j u v e n i l e s w h i c h d i d n o t r e s p o n s e t o t h e t o u c h o f a n e e d l e w e r e o b s e r v e d b y n a k e d e y e s a n d c o n s i d e r e d a s d e a d . T h e m e a n p e r c e n t a g e o f s u r v i v a l r a t e w a s c a l c u l a t e d b y c o m b i n i n g t h e d a t a f r o m t h r e e r e p l i c a t e s a t t h e e n d o f t h e e x p e r i m e n t . D a t a a n a l y s i s T o i n v e s t i g a t e t h e e f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e , a n d s u r v i v a l o f l a r v a e a n d j u v e n i l e s , a t w o - w a y a n a l y s i s o f v a r i a n c e ( A N O V A ) ( f i x e d f a c t o r s : t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y ) w i t h a 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l w a s u s e d . A l l d a t a w e r e t e s t e d f o r n o r m a l i t y a n d h o m o s c e d a s t i c i t y . O n s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e i n d i c a t i o n , T u k e y t e s t w a s u s e d t o v e r i f y t h e d i f f e r e n c e a m o n g t h e t r e a t m e n t s . T h e c o r r e l a t i o n b e t w e e n t h e s u r v i v a l a n d t h e t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y w a s e s t i m a t e d b y m u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s . R E S U L T S E x p e r i m e n t 1 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e h a t c h i n g s u c c e s s H a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a o v e r t h e t h r e e t e m p e r a t u r e s a n d t h r e e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n s f o r 9 6 h w a s p r e s e n t e d i n T a b l e 1 . T h e h i g h e s t h a t c h i n g o f 8 6 . 6 7 % a n d 1 0 0 % w e r e f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 3 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) , r e s p e c t i v e l y , w h i l e t h e l o w e s t h a t c h i n g 6 3 . 3 3 % w a s f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e l o w e s t s a l i n i t y ( 2 7 ) . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 3 7 8 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 T e m p e r a t u r e ( 0 C ) S a l i n i t y ( ) 2 7 3 0 3 3 2 5 6 3 . 3 3 + 2 5 . 2 0 8 3 . 3 3 + 1 5 . 3 0 8 6 . 6 7 + 5 . 7 0 3 0 7 6 . 6 7 + 1 1 . 5 0 8 6 . 6 7 + 1 5 . 3 0 9 6 . 6 7 + 2 0 . 8 0 3 5 7 6 . 6 7 + 2 0 . 8 0 8 3 . 3 3 + 1 5 . 3 0 1 0 0 T a b l e 1 . P e r c e n t a g e h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . M e a n v a l u e s a r e c a l c u l a t e d f r o m a t o t a l o f 3 r e p l i c a t e e x p e r i m e n t s V a l u e s w i t h d i f f e r e n t s u p e r s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 )

T w o - w a y A N O V A s h o w e d t h a t h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a w a s o n l y s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y s a l i n i t y ( F = 5 . 1 0 2 ; P = 0 . 0 1 8 ) b u t n o t f o r t e m p e r a t u r e ( F = 1 . 0 8 5 ; P = 0 . 3 5 9 ) . N o s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s w e r e o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t ( F = 0 . 2 2 0 ; P = 0 . 9 2 4 ) . T u k e y t e s t s h o w e d t h a t h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t b e t w e e n t h e s a l i n i t y o f 2 7 a n d 3 3 ( T a b l e 2 ) . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t o n l y s a l i n i t y ( P = 0 . 0 0 2 ) w e r e s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t , s h o w i n g a n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w i t h t h e p e r c e n t a g e h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a ( T a b l e 3 ) . I n a d d i t i o n a l , s t a n d a r d c o e f f i c i e n t ( B e t a ) o f s a l i n i t y ( 0 . 5 7 0 ) w a s h i g h e r t h a n t h a t o f t e m p e r a t u r e ( 0 . 2 2 8 ) , i n d i c a t i n g a h i g h e r c o r r e l a t i o n b e t w e e n s a l i n i t y a n d h a t c h i n g . T h e h i g h e r s a l i n i t y p r o v i d e d t h e h i g h e r h a t c h i n g . T h e m u l t i p l e r e g r e s s i o n e q u a t i o n o n h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a o v e r t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t y w e r e e s t i m a t e d a s f o l l o w s : H a t c h i n g = - 5 4 . 0 7 4 + 0 . 8 8 9 T e m p e r a t u r e + 3 . 7 0 4 S a l i n i t y T h e r e s p o n s e s u r f a c e p l o t s s u m m a r i z i n g p e r c e n t a g e h a t c h i n g u n d e r n i n e d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o v e r 9 6 h s h o w e d t h a t h i g h h a t c h i n g ( 9 5 % ) w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 . L o w e r t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t i e s r e d u c e d h a t c h i n g m a r k e d l y a n d h i g h e r s a l i n i t i e s h a d a m a r k e d p o s i t i v e e f f e c t a t l o w e r t e m p e r a t u r e s ( F i g 1 ) . E x p e r i m e n t 2 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l r a t e o f v e l i g e r l a r v a e S u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a o v e r t h e t h r e e t e m p e r a t u r e s a n d t h r e e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n s f o r 9 6 h w a s p r e s e n t e d i n T a b l e 4 . T h e h i g h e s t s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e o f 7 8 . 6 7 % a n d 4 7 . 0 0 % w e r e f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) , a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 3 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) , r e s p e c t i v e l y , w h i l e t h e l o w e s t s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e o f 2 3 . 3 3 % a n d 1 7 . 6 7 % w e r e f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e l o w e s t s a l i n i t y ( 2 7 ) , a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 3 5 0 C ) w i t h t h e l o w e s t s a l i n i t y ( 2 7 ) , r e s p e c t i v e l y . T w o - w a y A N O V A s h o w e d t h a t s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a w a s s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y t e m p e r a t u r e ( F = 1 6 6 2 . 0 1 ; P = 0 . 0 0 0 ) a n d s a l i n i t y ( F = 4 8 8 . 9 6 ; P = 0 . 0 0 0 ) . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s w e r e o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t a r e o b s e r v e d ( F = 1 5 2 . 6 9 ; P = 0 . 0 0 0 ) . T u k e y t e s t s h o w e d t h a t s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t o n e a n o t h e r a m o n g t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y t r e a t m e n t s ( T a b l e 5 ) . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t b o t h t e m p e r a t u r e ( P = 0 . 0 2 0 ) a n d s a l i n i t y ( P = 0 . 0 1 2 ) w e r e s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t , s h o w i n g a n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w i t h t h e p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a ( T a b l e 6 ) . I n a d d i t i o n a l , s t a n d a r d c o e f f i c i e n t ( B e t a ) o f s a l i n i t y ( 0 . 4 4 5 ) w a s h i g h e r t h a n t h a t o f t e m p e r a t u r e ( 0 . 4 0 6 ) , i n d i c a t i n g a h i g h e r c o r r e l a t i o n b e t w e e n s a l i n i t y a n d s u r v i v a l . I t a l s o i n d i c a t e d t h a t t h e h i g h e r s a l i n i t y p r o v i d e d t h e h i g h e r s u r v i v a l . T h e m u l t i p l e r e g r e s s i o n e q u a t i o n o n s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a o v e r t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t y w a s e s t i m a t e d a s f o l l o w s : S u r v i v a l = - 1 3 . 0 3 7 - 2 . 7 8 9 T e m p e r a t u r e + 5 . 0 9 3 S a l i n i t y T h e r e s p o n s e s u r f a c e p l o t s s u m m a r i z i n g p e r c e n t a g e h a t c h i n g u n d e r n i n e d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o v e r 9 6 h s h o w e d t h a t h i g h h a t c h i n g ( 9 0 % ) w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 0 . 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 . L o w e r t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t y r e d u c e d h a t c h i n g m a r k e d l y b u t h i g h e r t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t i e s h a d a m a r k e d p o s i t i v e e f f e c t ( F i g 2 ) . E x p e r i m e n t 3 : E f f e c t o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l r a t e o f e a r l y j u v e n i l e s S u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a o v e r t h e t h r e e t e m p e r a t u r e s a n d t h r e e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n s f o r 9 6 h w a s p r e s e n t e d i n T a b l e 7 . 3 7 9 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 F i g 1 . R e s p o n s e s u r f a c e p l o t s w i t h e s t i m a t i n g t h e m e a n p e r c e n t a g e h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . b a b y l o n i a a f t e r 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y .

T h e h i g h e s t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e s o f 1 0 0 % a n d 6 5 . 5 6 % w a s f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) , a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) , r e s p e c t i v e l y , w h i l e t h e l o w e s t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e s ( 1 5 . 5 6 % ) w a s f o u n d e d a t t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 3 5 0 C ) w i t h t h e l o w e s t s a l i n i t y ( 2 7 ) . T w o - w a y A N O V A s h o w e d t h a t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a w a s s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y t e m p e r a t u r e ( F = 6 0 5 . 1 9 2 ; P = 0 . 0 0 0 ) a n d s a l i n i t y ( F = 4 9 . 0 6 0 ; P = 0 . 0 0 0 ) . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t a r e o b s e r v e d ( F = 3 6 . 3 7 6 ; P = 0 . 0 0 0 ) . T u k e y t e s t s h o w e d t h a t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e s w e r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t o n e a n o t h e r a m o n g t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y t r e a t m e n t s ( T a b l e 8 ) . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s s h o w e d t h a t b o t h t e m p e r a t u r e ( P = 0 . 0 0 2 ) a n d s a l i n i t y ( P = 0 . 0 2 6 ) w e r e s t a t i s t i c a l l y s i g n i f i c a n t , s h o w i n g a n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w i t h t h e p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a ( T a b l e 9 ) . S t a n d a r d c o e f f i c i e n t ( B e t a ) o f t e m p e r a t u r e ( 0 . 8 1 8 ) w a s h i g h e r t h a n t h a t o f s a l i n i t y ( 0 . 2 5 1 ) , i n d i c a t i n g a h i g h e r c o r r e l a t i o n b e t w e e n t e m p e r a t u r e a n d s u r v i v a l . T h e m u l t i p l e r e g r e s s i o n e q u a t i o n o n s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a o v e r t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e s a n d s a l i n i t y w a s e s t i m a t e d a s f o l l o w s : S u r v i v a l = 1 6 5 . 1 7 6 6 . 1 4 8 T e m p e r a t u r e + 3 . 1 4 8 S a l i n i t y T h e r e s p o n s e s u r f a c e p l o t s s u m m a r i z i n g p e r c e n t a g e s u r v i v a l u n d e r n i n e d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o v e r 9 6 h s h o w e d t h a t h i g h s u r v i v a l ( 1 0 0 % ) w a s o b t a i n e d a t 2 9 - 3 5 0 C a n d 3 2 - 3 3 . H i g h e r t e m p e r a t u r e s a t a l l s a l i n i t i e s r e d u c e d h a t c h i n g m a r k e d l y ( F i g 3 ) . D I S C U S S I O N O u r r e s u l t s s h o w e d t h a t h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a w a s o n l y s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y s a l i n i t y b u t n o t f o r t e m p e r a t u r e . N o s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t . T h e h i g h e s t h a t c h i n g w a s f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 3 8 0 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 F i g 2 . R e s p o n s e s u r f a c e p l o t s w i t h e s t i m a t i n g t h e m e a n p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . b a b y l o n i a a f t e r 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . P a r a m e t e r s S u m o f s q u a r e d f M e a n s q u a r e F - v a l u e P - v a l u e I n t e r c e p t 1 8 9 1 7 0 . 3 7 1 1 8 9 1 7 0 . 3 7 8 6 5 . 6 9 0 . 0 0 0 T e m p e r a t u r e 4 7 4 . 0 7 2 2 3 7 . 0 3 1 . 0 8 0 . 3 5 9 S a l i n i t y 2 2 2 9 . 6 3 2 1 1 1 4 . 8 1 5 . 1 0 0 . 0 1 8 T e m p e r a t u r e x s a l i n i t y 1 9 2 . 5 9 4 4 8 . 1 4 0 . 2 2 0 . 9 2 4 E r r o r 3 9 3 3 . 3 3 1 8 2 1 8 . 5 1 T a b l e 2 . A N O V A c o m p a r i n g t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n p e r c e n t a g e h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) . P a r a m e t e r s B S t a n d a r d e r r o r B e t a t - v a l u e p - v a l u e I n t e r c e p t - 5 4 . 0 7 4 3 6 . 6 7 6 - 1 . 4 7 4 0 . 1 5 3 T e m p e r a t u r e 0 . 8 8 9 0 . 6 2 7 0 . 2 2 8 1 . 4 1 7 0 . 1 6 9 S a l i n i t y 3 . 7 0 4 1 . 0 4 6 0 . 5 7 0 3 . 5 4 2 0 . 0 0 2 T a b l e 3 . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s o f d a t a o n h a t c h i n g o f e g g c a p s u l e s B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) . S t a n d a r d e r r o r o f e s t i m a t i o n = 1 3 . 3 1 0 R = 0 . 6 1 4 R 2 = 0 . 3 7 7 A d j u s t e d R 2 = 0 . 3 2 6 F = 7 . 2 7 5 P = 0 . 0 0 3

s a l i n i t y ( 3 3 ) a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 3 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) . M u l t i p l e r e g r e s s i o n s s h o w e d a h i g h e r c o r r e l a t i o n b e t w e e n s a l i n i t y a n d h a t c h i n g . H i g h h a t c h i n g w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 . S u r v i v a l o f l a r v a e a n d e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a w e r e s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . A s i g n i f i c a n t i n t e r a c t i o n b e t w e e n b o t h f a c t o r s o c c u r r e d i n t h i s e x p e r i m e n t w a s o b s e r v e d . T h e h i g h e s t s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e s w a s f o u n d e d a t t h e l o w e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) a n d t h e h i g h e s t t e m p e r a t u r e ( 2 5 0 C ) w i t h t h e h i g h e s t s a l i n i t y ( 3 3 ) . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s s h o w e d a n e g a t i v e c o r r e l a t i o n w i t h t h e p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a a s w e l l a s i n d i c a t i n g a h i g h e r c o r r e l a t i o n b e t w e e n t e m p e r a t u r e a n d l a r v a l s u r v i v a l , a s w e l l a s s a l i n i t y a n d e a r l y j u v e n i l e s u r v i v a l . T h e r e s p o n s e s u r f a c e p l o t s s h o w e d t h a t h i g h s u r v i v a l o f l a r v a e w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 9 - 3 0 . 5 0 C a n d s a l i n i t y a b o v e 3 2 t o 3 3 a n d 2 9 - 3 5 0 C a n d 3 2 - 3 3 f o r e a r l y j u v e n i l e s . T h e r e s u l t s o f t h i s s t u d y a g r e e d w i t h v a r i o u s s t u d i e s t h a t s a l i n i t y h a d s t r o n g l y e f f e c t o n l a r v a e o f v a r i o u s m o l l u s k s ( D o r o u d i e t a l . 1 9 9 9 , T e t t e l b a c h & R h o d e 1 9 8 1 , D a v i s 2 0 0 0 a n d D o v e & O O c o n n e r 2 0 0 7 . D o r o u d i e t a l . ( 1 9 9 9 ) r e p o r t e d t h a t o p t i m a l c o n d i t i o n s f o r m a x i m u m l a r v a l s u r v i v a l o f t h e b l a c k - l i p p e a r l o y s t e r P i n c t a d a m a r g a r i t i f e r a w e r e 2 6 - 2 9 0 C a n d 2 8 - 3 2 . T e m p e r a t u r e o f 3 5 0 C o r g r e a t e r w e r e l e t h a l f o r l a r v a e a n d a t a l l t e m p e r a t u r e t e s t e d , l a r v a l s u r v i v a l w e r e l o w e s t a t a s a l i n i t y o f 4 0 . T e t t e l b a c h & R h o d e ( 1 9 8 1 ) r e p o r t e d t h a t o p t i m u m c o m b i n a t i o n o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y f o r s u r v i v a l o f t h e N o r t h e r n B a y s c a l l o p A r g o p e c t e n i r r a d i a n s l a r v a e f r o m 2 t o 5 d a y a f t e r f e r t i l i z a t i o n , a s e s t i m a t e d f r o m t h e r e s p o n s e s u r f a c e p l o t , w a s 1 8 . 7 0 C a n d 2 8 . 1 . T e m p e r a t u r e s o f 3 5 0 C o r g r e a t e r a n d / o r s a l i n i t i e s o f 1 0 o r l e s s w e r e l e t h a l f o r a l l l i f e s t a g e s o f t h i s s p e c i e s . D a v i s ( 2 0 0 0 ) s h o w e d t h a t a t t h e e n d o f 0 t o 7 d a y i n t e r v a l , p e r c e n t m o r t a l i t y o f t r o p i c a l g a s t r o p o d v e l i g e r s S t r o m b u s g i g a s w a s h i g h e s t f o r v e l i g e r s g r o w n a t 2 0 a n d 2 4 0 C a n d a t s a l i n i t y o f 4 5 , w h i l e p e r c e n t m o r t a l i t y w a s l o w a n d n o t d i f f e r e n t f o r v e l i g e r s 3 8 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 F i g 3 . R e s p o n s e s u r f a c e p l o t s w i t h e s t i m a t i n g t h e m e a n p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f n e w s e t t l e d j u v e n i l e B . b a b y l o n i a a f t e r 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . T e m p e r a t u r e ( 0 C ) S a l i n i t y ( ) 2 7 3 0 3 3 2 5 2 3 . 3 3 + 1 . 5 3 6 5 . 6 7 + 2 . 0 8 7 8 . 6 7 + 1 . 5 3 3 0 8 1 . 3 3 + 3 . 5 1 8 4 . 0 0 + 3 . 0 0 8 7 . 6 7 + 1 . 5 3 3 5 1 7 . 6 7 + 1 . 1 5 1 8 . 6 7 + 1 . 5 3 4 7 . 0 0 + 2 . 6 5 T a b l e 4 . P e r c e n t a g e s u r v i v a l r a t e o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . M e a n v a l u e s a r e c a l c u l a t e d f r o m a t o t a l o f 3 r e p l i c a t e e x p e r i m e n t s V a l u e s w i t h d i f f e r e n t s u p e r s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) P a r a m e t e r s S u m o f s q u a r e d f M e a n s q u a r e F - v a l u e P - v a l u e I n t e r c e p t 8 4 8 9 6 . 1 4 1 8 4 8 9 6 . 1 4 1 9 7 6 0 . 3 1 0 . 0 0 0 T e m p e r a t u r e 1 4 2 8 0 . 9 6 2 7 1 4 0 . 4 8 1 6 6 2 . 0 0 0 . 0 0 0 S a l i n i t y 4 2 0 1 . 4 0 2 2 1 0 0 . 7 0 4 8 8 . 9 5 0 . 0 0 0 T e m p e r a t u r e x s a l i n i t y 2 6 2 4 . 1 4 4 6 5 6 . 0 3 1 5 2 . 6 9 0 . 0 0 0 E r r o r 7 7 . 3 3 1 8 4 . 2 9 T a b l e 5 . A N O V A c o m p a r i n g t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) .

g r o w n a t 2 4 0 C a n d a t s a l i n i t y o f 3 0 , 3 5 a n d 4 0 . D o v e & O O c o n n e r ( 2 0 0 7 ) s h o w e d t h a t s a l i n i t y h a d a s i g n i f i c a n t e f f e c t o n D - v e l i g e r l a r v a l s u r v i v a l o f S y d n e y r o c k o y s t e r s S a c c o s t r e a g l o m e r a t a w h e r e a s t e m p e r a t u r e s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d s u r v i v a l o f b o t h D - v e l i g e r a n d p e d i v e l i g e r l a r v a e . T h e r e w a s a n i n t e r a c t i o n b e t w e e n s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e f o r D - v e l i g e r l a r v a l s u r v i v a l . W h i l e s p a t s u r v i v a l w a s s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d b y s a l i n i t y o n l y a n d n o i n t e r a c t i o n w a s d e t e c t e d b e t w e e n s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e f o r s p a t s u r v i v a l . I n a d d i t i o n , r e s u l t s o f t h i s s t u d y a l s o a g r e e d w i t h t h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n l a r v a e a n d j u v e n i l e s o f v a r i o u s o r g a n i s m s ; c r a b ( P a u l a e t a l . 2 0 0 3 , N u r d i a n i & Z e n g 2 0 0 7 ) a n d s h r i m p ( P a l a f o x e t a l . 1 9 9 7 , J a c k s o n & B u r f o r d 2 0 0 3 a n d Z a c h a r i a & K a k a t i 2 0 0 4 ) . P a l a f o x e t a l . ( 1 9 9 7 ) i n d i c a t e d t h a t g o o d s u r v i v a l ( 8 0 t o 9 0 % ) o f P e n a e u s v a n n a m e i p o s t l a r v a e w a s o b t a i n e d b e l o w 3 0 0 C a n d b e l o w 4 0 . H i g h e r t e m p e r a t u r e s r e d u c e d s u r v i v a l m a r k e d l y . H i g h e r s a l i n i t i e s o n l y h a d a m a r k e d n e g a t i v e e f f e c t a t h i g h e r t e m p e r a t u r e s . T h e o p t i m u m t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y c o n d i t i o n s f o r s u r v i v a l o f P . v a n n a m e i p o s t l a r v a e c o i n c i d e s t h e b e s t a t 2 8 t o 3 0 0 C a n d 3 3 t o 4 0 . J a c k s o n & B u r f o r d ( 2 0 0 3 ) s h o w e d t h a t s a l i n i t y d i d n o t h a v e a s i g n i f i c a n t e f f e c t o n s u r v i v a l o f l a r v a l s h r i m p P e n a e u s s e m i s u l c a t u s a b o v e 2 8 . A t 2 8 , s u r v i v a l r a t e d e c r e a s e d , w h i l e t e m p e r a t u r e h a d a s u b s t a n t i a l a n d r e g u l a r i n f l u e n c e o n g r o w t h r a t e . Z a c h a r i a & K a k a t i ( 2 0 0 4 ) s h o w e d t h a t s a l i n i t y e x e r t e d a g r e a t e r i n f l u e n c e t h a n t e m p e r a t u r e o n t h e s u r v i v a l a n d d e v e l o p m e n t o f l a r v a e P e n a e u s m e r g u i e n s i s . T h e b e s t t e m p e r a t u r e s a l i n i t y c o m b i n a t i o n f o r h a t c h i n g a n d l a r v a l s u r v i v a l w a s o b t a i n e d a t 3 3 0 C a n d 3 5 , a n d a s a l i n i t y r a n g e o f 3 0 - 3 5 i s i d e a l f o r l a r v a l d e v e l o p m e n t . P a u l a e t a l . ( 2 0 0 3 ) i n d i c a t e d t h a t f o r a l l z o e a l s t a g e s o f m a n g r o v e c r a b P a r a s e s a r m a c a t e n a a t a , t h e h i g h e s t s u r v i v a l w a s o b t a i n e d a t t e m p e r a t u r e o f 2 5 0 C a n d s a l i n i t y o f 3 5 , b u t s u r v i v a l d e c r e a s e d t o w a r d s t h e l o w e r a n d h i g h e r s a l i n i t y . N u r d i a n i & Z e n g ( 2 0 0 7 ) s h o w e d t h a t t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y a s w e l l a s t h e i n t e r a c t i o n o f t h e t w o p a r a m e t e r s s i g n i f i c a n t l y a f f e c t e d t h e s u r v i v a l o f z o e a l l a r v a e o f m u d c r a b J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 3 8 2 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 P a r a m e t e r s B S t a n d a r d e r r o r B e t a t - v a l u e p - v a l u e I n t e r c e p t - 1 3 . 0 3 7 6 5 . 3 0 9 - . 0 2 0 0 0 . 8 4 3 T e m p e r a t u r e - 2 . 7 8 9 1 . 1 1 7 - 0 . 4 0 6 - 2 . 4 9 6 0 . 0 2 0 S a l i n i t y 5 . 0 9 3 4 . 8 6 2 0 . 4 4 5 2 . 7 3 5 0 . 0 1 2 T a b l e 6 . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s o f d a t a o n s u r v i v a l o f v e l i g e r l a r v a e B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) . S t a n d a r d e r r o r o f e s t i m a t i o n = 2 3 . 7 0 1 R = 0 . 6 0 3 R 2 = 0 . 3 6 4 A d j u s t e d R 2 = 0 . 3 1 1 F = 6 . 8 5 5 P = 0 . 0 0 4 T e m p e r a t u r e ( 0 C ) S a l i n i t y ( ) 2 7 3 0 3 3 2 5 9 3 . 3 3 + 1 9 8 . 8 9 + 1 . 9 2 1 0 0 3 0 9 2 . 2 3 + 1 . 9 3 9 2 . 2 3 + 3 . 0 5 9 2 . 2 3 + 1 . 9 3 3 5 1 5 . 5 6 + 5 . 0 9 2 6 . 6 7 + 5 . 7 7 6 5 . 5 6 + 7 . 7 0 T a b l e 7 . P e r c e n t a g e s u r v i v a l r a t e o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y . M e a n v a l u e s a r e c a l c u l a t e d f r o m a t o t a l o f 3 r e p l i c a t e e x p e r i m e n t s V a l u e s w i t h d i f f e r e n t s u p e r s c r i p t l e t t e r s a r e s i g n i f i c a n t l y d i f f e r e n t ( P < 0 . 0 5 ) P a r a m e t e r s S u m o f s q u a r e d f M e a n s q u a r e F - v a l u e P - v a l u e I n t e r c e p t 1 5 2 6 1 6 . 9 0 1 1 5 2 6 1 6 . 9 0 8 8 2 6 . 8 2 0 . 0 0 0 T e m p e r a t u r e 2 0 9 2 7 . 6 7 2 1 0 4 6 3 . 8 4 6 0 5 . 1 9 0 . 0 0 0 S a l i n i t y 1 6 9 6 . 5 1 2 8 4 8 . 2 5 4 9 . 0 6 0 . 0 0 0 T e m p e r a t u r e x s a l i n i t y 2 5 1 5 . 7 7 4 6 2 8 . 9 4 3 6 . 3 7 0 . 0 0 0 E r r o r 3 1 1 . 2 2 1 8 1 7 . 2 9 T a b l e 8 . A N O V A c o m p a r i n g t h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n p e r c e n t a g e s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) .

S c y l l a s e r r a t e . A t l o w s a l i n i t y , b o t h h i g h a n d l o w t e m p e r a t u r e l e d t o m a s s m o r t a l i t y o f n e w l y h a t c h e d l a r v a e , w h i l e t h e l o w t e m p e r a t u r e a n d h i g h s a l i n i t y c o m b i n a t i o n o f 2 5 0 C a n d 3 5 g L - 1 r e s u l t e d i n t h e h i g h e s t s u r v i v a l t o t h e m e g a l o p a l s t a g e . T h i s s t u d y i s t h e f i r s t s t u d y t o i n v e s t i g a t e s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e e f f e c t s o n h a t c h i n g s u c c e s s , a n d s u r v i v a l o f l a r v a e a n d e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a . A l t h o u g h t h e r e s u l t s s u g g e s t t h e p o s s i b i l i t y t h a t t h e c u l t u r e a n d n a t u r a l p o p u l a t i o n o f t h i s s p e c i e s i n G u l f o f T h a i l a n d m a y s u f f e r m o r t a l i t y f r o m h i g h e r w a t e r t e m p e r a t u r e d u e t o c l i m a t e c h a n g e a n d l o w e r s a l i n i t y f r o m h e a v y r a i n f a l l . A C K N O W L E D G E M E N T T h i s r e s e a r c h w a s a p a r t o f t h e R e s e a r c h U n i v e r s i t y P r o g r a m f u n d e d b y C h u l a l o n g k o r n U n i v e r s i t y ( C C 1 0 3 A ) . T h e a u t h o r s t h a n k S i c h a n g M a r i n e S c i e n c e R e s e a r c h a n d T r a i n i n g S t a t i o n , A q u a t i c R e s o u r c e s R e s e a r c h I n s t i t u t e , C h u l a l o n g k o r n U n i v e r s i t y , i n p a r t i c u l a r M r . S o o n t o r n T h e p m o o n f o r h e l p i n t h e h a t c h e r y a n d p r o v i d i n g o f a l g a e . T h e a u t h o r s a l s o t h a n k t o A s s o c i a t e d P r o f e s s o r D r . G u l l a y a W a t t a y a k o r n f o r v a l u a b l e c o m m e n t s a n d c o o r d i n a t i o n s d u r i n g t h e p r e p a r a t i o n o f t h i s r e s e a r c h p r o j e c t . R E F E R E N C E S A l b u q u e r q u e E F , M e u r e r B a n d N e t t o G C G . 2 0 0 9 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l r a t e s o f c o x i c e r b e r u s r a m o s a e ( A l b u q u e r q u e , 1 9 7 8 ) , a n i n t e r s t i t i a l i s o p o d o f a s a n d y b e a c h o n t h e c o a s t o f B r a z i l . B r a z i l i a n A r c h i v e s o f B i o l o g y a n d T e c h n o l o g y 5 2 : 1 1 7 9 - 1 1 8 7 . A s h a P S & M u t h i a h P . 2 0 0 5 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e , s a l i n i t y a n d p H o n l a r v a l g r o w t h , s u r v i v a l a n d d e v e l o p m e n t o f t h e s e a c u c u m b e r H o l o t h u r i a s p i n i f e r a T h e e l . A q u a c u l t u r e 2 5 0 : 8 2 3 - 8 2 9 . B e r l i n s k y D L , T a y l o r J C , H o w e l l R A , B r a d l e y T M a n d S m i t h T I J . 2 0 0 4 . T h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n e a r l y l i f e s t a g e s o f b l a c k s e a b a s s C e n t r o p r i s t i s s t r i a t a . J o u r n a l o f t h e W o r l d A q u a c u l t u r e S o c i e t y 3 5 : 3 3 5 - 3 4 4 . C h a i t a n a w i s u t i N a n d K r i t s a n a p u n t u A . 1 9 9 7 . L a b o r a t o r y s p a w n i n g a n d j u v e n i l e r e a r i n g o f t h e m a r i n e g a s t r o p o d : S p o t t e d b a b y l o n , B a b y l o n i a a r e o l a t a L i n k , 1 8 0 7 ( N e o g a s t r o p o d a : B u c c i n i d a e ) i n T h a i l a n d . J o u r n a l o f S h e l l f i s h R e s e a r c h 1 6 : 3 1 - 3 7 . C o o k M A , G u t h r i e l K M , R u s t M B a n d P l e s h a P D . 2 0 0 5 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y d u r i n g i n c u b a t i o n o n h a t c h i n g a n d d e v e l o p m e n t o f l i n g c o d O p h i o d o n e l o n g a t e s G i r a r d , e m b r y o s . A q u a c u l t u r e R e s e a r c h 3 6 : 1 2 9 8 - 1 3 0 3 . C h e n J C a n d C h e n W C . 2 0 0 0 . S a l i n i t y t o l e r a n c e o f H a l i o t i s d i v e r s i c o l o r s u p e r t e x t a a t d i f f e r e n t s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e l e v e l s . A q u a c u l t u r e 1 8 1 : 1 9 1 - 2 0 3 . D o r o u d i M S , S o u t h g a t e P C a n d M a y e r R J . 1 9 9 9 . T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n e m b r y o s a n d l a r v a e o f t h e b l a c k - l i p p e a r l o y s t e r P i n c t a d a m a r g a r i t i f e r a . A q u a c u l t u r e R e s e a r c h 3 0 : 2 7 1 - 2 7 7 . D a w i r s R R . 1 9 7 9 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n l a r v a l d e v e l o p m e n t o f P a g u r u s b e r n h a r d u s ( D e c a p o d a , P a g u r i d a e . M a r i n e E c o l o g y P r o g r e s s S e r i e s 1 : 3 2 3 - 3 2 9 . D a v i s M . 2 0 0 0 . T h e c o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n g r o w t h , d e v e l o p m e n t , a n d s u r v i v a l f o r t r o p i c a l g a s t r o p o d v e l i g e r s o f S t r o m b u s g i g a s . J o u r n a l o f S h e l l f i s h r e s e a r c h 1 9 : 8 8 3 - 8 8 9 . D o n g Y . a n d D o n g S . 2 0 0 6 . G r o w t h a n d o x y g e n c o n s u m p t i o n o f t h e j u v e n i l e s s e a c u c u m b e r 3 8 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1 P a r a m e t e r s B S t a n d a r d e r r o r B e t a t - v a l u e p - v a l u e I n t e r c e p t 1 6 5 . 1 7 6 4 6 . 5 0 3 3 . 5 5 2 0 . 0 0 2 T e m p e r a t u r e - 6 . 1 4 8 0 . 7 9 6 - 0 . 8 1 8 - 7 . 7 2 8 0 . 0 0 0 S a l i n i t y 3 . 1 4 8 1 . 3 2 6 0 . 2 5 1 2 . 3 4 7 0 . 0 2 6 T a b l e 9 . M u l t i p l e r e g r e s s i o n a n a l y s i s o f d a t a o n s u r v i v a l o f e a r l y j u v e n i l e B . a r e o l a t a t h r o u g h 9 6 h u n d e r 9 d i f f e r e n t c o m b i n a t i o n s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y ( 9 5 % c o n f i d e n c e i n t e r v a l ) . S t a n d a r d e r r o r o f e s t i m a t i o n = 1 6 . 8 7 6 R = 0 . 8 5 5 R 2 = 0 . 7 3 1 A d j u s t e d R 2 = 0 . 7 0 9 F = 3 2 . 6 7 9 P = 0 . 0 0 0

A p o s t i c h o p u s j a p o n i c u s a t c o n s t a n t a n d f l u c t u a t i n g w a t e r t e m p e r a t u r e . A q u a c u l t u r e r e s e a r c h 3 7 : 1 3 2 7 - 1 3 3 3 . D o v e M C . a n d O O c o n n e r W A . 2 0 0 7 . S a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e s t o l e r a n c e o f S y d n e y r o c k o y s t e r s S a c c o s t r e a g l o m e r a t a d u r i n g e a r l y o n t o g e n y . J o u r n a l o f S h e l l f i s h R e s e a r c h 2 6 : 9 3 9 - 9 4 7 . J i T , D o n g Y a n d D o n g S . 2 0 0 8 . G r o w t h a n d p h y s i o l o g i c a l r e s p o n s e s i n t h e s e a c u c u m b e r , A p o s t i c h o p u s j a p o n i c u s : A e s t i v a t i o n a n d t e m p e r a t u r e . A q u a c u l t u r e 2 8 3 : 1 8 0 - 1 8 7 . J a c k s o n C J . a n d B u r f o r d M A . 2 0 0 3 . T h e e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n g r o w t h a n d s u r v i v a l o f l a r v a l s h r i m p P e n a e u s s e m i s u l c a t u s ( D e c a p o d a : P e n a e o i d e a ) . J o u r n a l o f C r u s t a c e a n B i o l o g y 2 3 : 8 1 9 - 8 2 6 . L a v i t r a T , F o h y N , G e s t i n P G , R a s o l o f o n i r i n a R a n d E e c k h a u t L . 2 0 1 0 . E f f e c t o f w a t e r t e m p e r a t u r e o n t h e s u r v i v a l a n d g r o w t h o f e n d o b e n t h i c H o l o t h u r i a s c a b r a ( E c h i n o d e r m a t a : H o l o t h u r i d a e ) j u v e n i l e s r e a r e d i n o u t d o o r p o n d s . S P C B e c h e - d e - m e r I n f o r m a t i o n B u l l e t e i n 3 0 : 2 5 - 2 8 . L u J , L i n Q , S u n Y , S h e n g J a n d C h e n Q . 2 0 0 4 . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n t h e e a r l y d e v e l o p m e n t o f H a l i o t i s d i v e r s i c o l o r R e e v . J o u r n a l o f S h e l l f i s h r e s e a r c h 2 3 : 9 6 3 - 9 6 6 . M e n e L , A l v a r e z - O s s o r i o M T , G o n z a l e s z - G u r r i a r a n E a n d V a l d e s L . 1 9 9 1 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n l a r v a l d e v e l o p m e n t o f N e c o r a p u b e r ( B r a c h y u r a : P o r t u n i d a e ) . M a r i n e B i o l o g y 1 0 8 : 7 3 - 8 1 . N a g a r a j M . 1 9 8 8 . C o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e c o m p l e t e d e v e l o p m e n t o f E u r y t e m o r a v e l o x ( C r u s t a c e a : C a l a n o i d e a ) . M a r i n e B i o l o g y 9 9 : 3 5 3 - 3 5 8 . N u r d i a n i R a n d Z e n g C . 2 0 0 7 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n t h e s u r v i v a l a n d d e v e l o p m e n t o f m u d c r a b S c y l l a s e r r a t a l a r v a e . A q u a c u l t u r e R e s e a r c h 3 8 : 1 5 2 9 - 1 5 3 8 . P a u l a J , M e n d e s R N , M w a l u m a J , R a e d i g C a n d E m m e r s o n W . 2 0 0 3 . C o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n l a r v a l d e v e l o p m e n t o f t h e m a n g r o v e c r a b P a r a s e s a r m a c a t e n a a t a O r t m a n , 1 8 9 7 ( B r a c h y u r a : S e s a r m i d a e ) . W e s t e r n I n d i a n O c e a n J o u r n a l o f M a r i n e S c i e n c e 2 : 5 7 - 6 3 . P o n c e - P a l a f o x J , M a r t i n e z - P a l a c i o s C A a n d R o s s L G . 1 9 9 7 . T h e e f f e c t s o f s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e o n t h e g r o w t h a n d s u r v i v a l r a t e s o f j u v e n i l e w h i t e s h r i m p , P e n a e u s v a n n a m e i , B o o n e , 1 9 3 1 . A q u a c u l t u r e 1 5 7 : 1 0 7 - 1 1 5 . T a y l o r J J , S o u t h g a t e P C a n d R o s e R A . 2 0 0 4 . E f f e c t s o f s a l i n i t y o n g r o w t h a n d s u r v i v a l o f s i l v e r - l i p p e a r l o y s t e r , P i n c t a d a m a x i m a s p a t . J o u r n a l o f S h e l l f i s h r e s e a r c h 2 3 : 3 7 5 - 3 7 7 . T e t t e l b a c h S T . a n d R h o d e s E W . 1 9 8 1 . C o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n e m b r y o s a n d l a r v a e o f t h e n o r t h e r n b a y s c a l l o p A r g o p e c t e n i r r a d i a n t i r r a d i a n s . M a r i n e B i o l o g y 6 3 : 2 4 9 - 2 5 6 . R o b e r t R , H i s E a n d D i n e t A . 1 9 8 8 . C o m b i n e d e f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n f e d a n d s t a r v e d l a r v a e o f t h e E u r o p e a n f l a t o y s t e r O s t r e a e d u l i s . M a r i n e B i o l o g y 9 7 : 9 5 - 1 0 0 . S h i Y H , Z h a n g G Y , Z h u Y Z , L i u J Z a n d Z a n g W I . 2 0 1 0 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e o n f e r t i l i z e d e g g s a n d l a r v a e o f t a w n y p u f f e r T a k i f u g u f l a v i d u s . A q u a c u l t u r e r e s e a r c h 4 1 : 1 7 4 1 - 1 7 4 7 . Z h e n g H , Z h u J , K e C , Z h o u S a n d L i F . 2 0 0 0 . E f f e c t s o f t e m p e r a t u r e a n d s a l i n i t y o n e m b r y o n i c d e v e l o p m e n t o f B a b y l o n i a f o r m o s a e h a b e i ( G a s t r o p o d a : B u c c i n i d a e ) . J o u r n a l o f O c e a n o g r a p h y i n T a i w a n S t r a i t 1 9 : 1 - 5 . Z a c h a r i a S a n d K a k a t i V S . 2 0 0 4 . O p t i m a l s a l i n i t y a n d t e m p e r a t u r e f o r e a r l y d e v e l o p m e n t a l s t a g e s o f P e n a e u s m e r g u i e n s i s D e m a n . A q u a c u l t u r e 2 3 2 : 3 7 3 - 3 8 2 . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 1 ) 5 : 3 7 6 - 3 8 4 3 8 4 C h a i t a n a w i s u t i e t a l . , 2 0 1 1