J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y V a r i a t i o n s i n L C 5 0 o f s o m e p e s t i c i d e s d u e t o p h y s i c o - c h e m i c a l p a r a m e t e r s a n d i m p a c t o f s e v i n o n n e u r o s e c r e t o r y c e l l s o f a f r e s h w a t e r s n a i l , T h i a r a l i n e a t e K e y w o r d s : T h i a r a l i n e a t a , S e v i n , N e u r o s e c r e t i o n . A B S T R A C T : A q u a t i c c o n t a m i n a t i o n b y p e s t i c i d e s i s a r i s i n g a s a r e s u l t o f t h e i r e x t e n s i v e u s e i n a g r i c u l t u r e a n d p u b l i c h e a l t h p r o g r a m m e s . H o w e v e r , i n d i s c r i m i n a t e u s e o f t h e s e p e s t i c i d e s f o r c r o p p r o t e c t i o n c a u s e s m u c h d a m a g e t o t h e a q u a t i c f a u n a . T h e s n a i l a n a q u a t i c f a u n a i s e c o n o m i c a l l y i m p o r t a n t w h i c h s e r v e s a s a n i n t e r m e d i a t e h o s t o f v a r i o u s t r e m a t o d p a r a s i t e s , w h i c h c a u s e s s e v e r e d i s e a s e s t o h u m a n b e i n g a s w e l l a s d o m e s t i c a n i m a l s . T h e g a s t r o p o d m o l l u s c , T h i a r a l i n e a t a i s a f i l t e r f e e d e r a t t h e s e c o n d a r y l e v e l o f f r e s h w a t e r e c o s y s t e m . H e n c e f e l t n e c e s s a r y t o s t u d y a l t e r a t i o n i n t h e L C 5 0 a n d n e u r o s e c r e t i o n . T h e a c c l i m a t i z e d , h e a l t h y , a c t i v e a n d a p p r o x i m a t e l y s a m e w e i g h t a n d s i z e d m a t u r e a d u l t a n d i m m a t u r e a n i m a l s , g r o u p s o f t e n s n a i l s e a c h w e r e e x p o s e d ( i n P l a s t i c t r o u g h s e a c h c o n t a i n i n g 1 l i t e r o f w a t e r ) t o O r g a n o c h l o r i n e ( E n d o s u l f a n ) , O r g a n o p h o s p h a t e ( N u v a c r o n ) , s y n t h e t i c p y r e t h r o i d s ( C y m b u s h ) a n d C a r b a m a t e ( S e v i n ) . T h e L C 5 0 v a l u e s f o r 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h o u r s w e r e c a l c u l a t e d . T h e p h y s i c o - c h e m i c a l p a r a m e t e r s o f w a t e r u s e d f o r h o l d i n g t h e a n i m a l h a d t e m p e r a t u r e b e t w e e n 2 6 - 2 8 0 C , p H 7 . 1 t o 7 . 3 , t o t a l h a r d n e s s 1 4 0 t o 1 5 0 p p m a n d o x y g e n c o n t e n t o f 5 . 6 t o 7 m l / l i t . T h e p h y s i c o - c h e m i c a l f a c t o r s a f f e c t i n g t h e L C 5 0 l i k e t e m p e r a t u r e , p H , S a l i n i t y a n d P h o t o p e r i o d i s m l i g h t a n d d a r k h o u r s w e r e s t u d i e d . D u r i n g t h e s t r e s s c o n d i t i o n s n e u r o s e c r e t i o n s a r e a d v e r s e l y a f f e c t e d . T h e s n a i l a r e e x p o s e d t o p r e d e t e r m i n e d s u b - l e t h a l c o n c e n t r a t i o n o f s e v i n ( 0 . 9 1 3 p p m ) f o r 1 , 7 a n d 1 4 d a y s , s i m u l t a n e o u s l y c o n t r o l s w e r e r u n . A f t e r e x p o s u r e , I t w a s f o u n d t h a t t h e n u m b e r o f t h e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s ' A ' a n d ' B ' h a s s u d d e n l y d i s c h a r g e d n e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l . N e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l w a s f o u n d t o b e r e m a i n i n g a c c u m u l a t e d i n c o n t r o l s n a i l s . 0 5 0 - 0 5 6 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 1 © F i c u s P u b l i s h e r s . T h i s O p e n A c c e s s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n , a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . S u b m i t Y o u r M a n u s c r i p t w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m J o u r n a l o f R e s e a r c h i n b i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O p e n A c c e s s O n l i n e R e s e a r c h J o u r n a l A u t h o r s : A h i r r a o K D 1 , K e d k a r G D 2 . I n s t i t u t i o n : 1 . D e p a r t m e n t o f Z o o l o g y , R a n i L a x m i b a i C o l l e g e , P a r o l a , D i s t - J a l g a o n . ( M S ) 4 2 5 1 1 1 I n d i a . 2 . Z o o l o g y D e p t . , D r . B a b a s a h e b A m b e d k a r M a r a t h w a d a U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d . ( M S ) I n d i a . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : A h i r r a o K i r a n D . E m a i l : d r k i r a n a h i r a o @ g m a i l . c o m W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / D o c u m e n t s / R A 0 1 4 4 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 1 3 N o v 2 0 1 1 / A c c e p t e d : 2 6 N o v 2 0 1 1 / P u b l i s h e d : 2 3 J a n 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : A h i r r a o K D , K e d k a r G D . V a r i a t i o n s i n L C 5 0 o f s o m e p e s t i c i d e s d u e t o p h y s i c o - c h e m i c a l p a r a m e t e r s a n d i m p a c t o f s e v i n o n n e u r o s e c r e t o r y c e l l s o f a f r e s h w a t e r s n a i l , T h i a r a l i n e a t e . J o u r n a l o f r e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l O n l i n e O p e n A c c e s s P u b l i c a t i o n g r o u p O r i g i n a l R e s e a r c h P a p e r

I N T R O D U C T I O N M a n y s n a i l s s e r v e a s a n i n t e r m e d i a t e h o s t s f o r a n u m b e r o f p a r a s i t e s c a u s i n g s e v e r a l d i s e a s e s t o m a n a n d l i v e s t o c k s w h i l e s o m e s n a i l s a n d s l u g s a c t a s c r o p p e s t s a f f e c t i n g a g r i c u l t u r a l , h o r t i c u l t u r a l , f o r e s t a n d g a r d e n p l a n t s . T h e s n a i l , T h i a r a l i n e a t a a c t s a s a n i n t e r m e d i a t e h o s t f o r S c h i s t o s o m e p a r a s i t e s . I f t h e s n a i l s a n d s l u g s a r e t o b e d i r e c t l y c o n t r o l l e d , i t i s e s s e n t i a l t o u n d e r s t a n d t h e e c o l o g y a n d c h e m i c a l c o n t r o l o f s l u g a n d s n a i l s . M a g a r e a n d K u l k a r n i , ( 1 9 9 5 ) s t u d i e d t h e S e a s o n a l L C 5 0 v a r i a t i o n s i n P a r a t o x e x p o s e d f r e s h w a t e r s n a i l , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s . M a n y w o r k e r s h a v e w o r k e d o n s n a i l s l i k e L . a l t e ( B o d h a n k a r , 1 9 8 4 ) , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s ( P a t i l e t . a l , 1 9 9 1 ; P a t i l a n d M a h a l e , 2 0 1 0 ) Z o o t e c u s i n s u l a r i s ( C h a u d h a r i a n d K u l k a r n i , 1 9 9 3 ) , T h i a r a l i n e a t a ( P a t i l e t . a l . , 1 9 9 3 ; a n d C h a u d h a r i e t . a l . , 1 9 9 9 ) s t u d i e d L C 5 0 o n t h e m o l l u s c s . I n g a s t r o p o d s , t h e n e r v o u s s y s t e m i s c o n s t r u c t e d o n t h e s a m e g e n e r a l p l a n a s i n t h e o t h e r m o l l u s c s u n d e r g o . M o s t o f t h e i n f o r m a t i o n i s a v a i l a b l e o n t h e n e r v o u s s y s t e m o f g a s t r o p o d s t h a t t o m o s t l y o f P u l m o n a t e s . T h e n e r v o u s s y s t e m i n P r o s o b a r a n c h s h a v e b e e n s t u d i e d b y a f e w w o r k e r s ( B a k e r , 1 9 2 5 , C r o f t s 1 9 2 9 , M o r t a n 1 9 5 6 , a n d V a n d e r S c h a l i e a n d D u n d e e , 1 9 5 6 ) T h e m o s t p r i m i t i v e t y p e o f n e r v o u s s y s t e m i n P r o s o b r a n c h s i s o f H a l i o t i s , w h i c h h a s b e e n d e s c r i b e d b y C r o f t s ( 1 9 2 9 ) T h o u g h s o m e e x t e n s i v e s t u d i e s h a v e b e e n m a d e o n t h e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m o f g a s t r o p o d s t h e e n d o c r i n o l o g i c a l a s p e c t s a r e r a t h e r d i f f e r e n t i n t h e t h r e e s u b c l a s s e s a n d a b o v e a l l t h e k n o w l e d g e w e h a v e o f t h e m i s v e r y s c a n t y . T h e e s s e n t i a l d a t a c o n c e r n i n g t h e n e u r o s e c r e t i o n o f t h e P r o s o b r a n c h s a r e f o u n d i n a s m a l l n u m b e r o f p u b l i c a t i o n s . M a n y w o r k e r s h a v e w o r k e d o n t h e n e r v o u s s y s t e m o f t h e s e g a s t r o p o d v i z . L a e v i c a u l i s a l t e ( N a g a b h u s h a n a m a n d K u l k a r n i , 1 9 7 1 ) , M e l a n i a s c a b r a ( M u l e y , 1 9 7 4 ; N a g a b h u s h a n a m a n d M u l e y , 1 9 7 1 ) , V i v i p a r o u s b e n g a i e n s i s ( U t k a r , 1 9 8 2 ) , I . e x u s t u s ( S h i n d e , 1 9 9 1 ) C e r a s t u s m o s s o n i a n u s ( M a g a r e 1 9 9 1 ; M a g a r e a n d K u l k a r n i , 1 9 9 5 ; U t k a r a n d K u l k a r n i 2 0 0 0 ) . T h e p r e s e n t s t u d y w a s u n d e r t a k e n w i t h t h e a i m t o e x t e n d o u r k n o w l e d g e o f n e u r o s e c r e t i o n i n p r o s o b a n c h s . T h e p r i n c i p l e o b j e c t i v e w e r e t o i n v e s t i g a t e ( 1 ) T h e p r e s e n c e a n d d i s t r i b u t i o n o f n e u r o s e c r e t o r y c e l l s i n t h e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m o f T h i a r a l i n e a t a , ( 2 ) N e u r o e n d o c r i n e r e g u l a t i o n o f v a r i o u s p h y s i o l o g i c a l a c t i v i t i e s a n d ( 3 ) E f f e c t o f s e v i n o n t h e n e u r o e n d o c r i n e c e l l s o f b r a i n M A T E R I A L S A N D M E T H O D S T h e f r e s h w a t e r s n a i l , T h i a r a l i n e a t a w e r e c o l l e c t e d f r o m B o r i r i v e r n e a r T a m a s w a d i , T a l - P a r o l a , D i s t - J a l g a o n , M a h a r a s h t r a S t a t e , I n d i a . T h e y w e r e b r o u g h t t o t h e l a b o r a t o r y , c l e a n e d t o r e m o v e t h e f o u l i n g a l g a l b i o m a s s a n d m u d . a n d w e r e p l a c e d i n w e l l a e r a t e d f i b e r t r o u g h s c o n t a i n i n g s u f f i c i e n t w a t e r f o r f i v e d a y s f o r a c c l i m a t i z a t i o n . T h e y w e r e n o t s t a r v e d a t t h e t i m e o f e x p e r i m e n t a t i o n . T h e h e a l t h y , a c t i v e , a p p r o x i m a t e l y s a m e s i z e d a n d m a t u r e a d u l t w e r e e x p o s e d t o p e s t i c i d e t o c a l c u l a t e L C 5 0 v a l u e s f o r d i f f e r e n t p e s t i c i d e s v i z . O r g a n o c h l o r i n e ( E n d o s u l f a n ) , O r g a n o p h o s p h a t e ( N u v a c r a n ) , S y n t h e t i c P y r e t h r o i d ( C y m b u s h ) a n d C a r b a m a t e ( S e v i n ) . V a l u e s a r e e s t i m a t e d b y t h e m e t h o d o f P r o b i t A n a l y s i s ( F i n n e y , 1 9 7 1 ) . F o r a g e r e l a t e d m o r t a l i t y e x p e r i m e n t s , t h e s n a i l s h a v i n g l e n g t h l e s s t h a n 2 0 . 0 0 m m w e r e c o n s i d e r e d t o b e i m m a t u r e a n d t h e s n a i l s h a v i n g l e n g t h 2 2 . 0 0 m m t o 2 5 . 0 0 m m o r m o r e w e r e c o n s i d e r e d t o b e m a t u r e . E x p e r i m e n t s w e r e c a r r i e d o u t s e p a r a t e l y f o r i m m a t u r e a n d m a t u r e s n a i l s . T h e a d u l t S n a i l s w e r e e x p o s e d t o p r e - d e t e r m i n e d s u b - l e t h a l c o n c e n t r a t i o n o f S e v i n f o r 1 , 7 a n d 1 4 d a y s , s i m u l t a n e o u s l y c o n t r o l s w e r e r u n , t o s t u d y t h e n e u r o s e c r e t i o n . A f t e r e x p o s u r e p e r i o d , t h e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m w a s q u i c k l y a n d c a r e f u l l y d i s s e c t e d o u t f r o m t h e s n a i l a n d w a s f i x e d i n a q u e o u s B o i n s f l u i d f o r 2 4 h o u r s . I t w a s t h e n d e h y d r a t e d i n a l c o h o l b y t h e d i f f e r e n t g r a d e s c l e a r e d i n x y l o l a n d e m b e d d e d i n p a r a f f i n w a x a t 5 8 - 6 0 0 C ( S t a n d a r d m i c r o - t e c h n i q u e ) s e r i a l s e c t i o n s o f 5 - 6 u t h i c k n e s s w e r e c u t a n d s u b j e c t e d t o " M e l l o r y ' s T r i p l e S t a i n i n g " ( M a l l o r y , 1 9 4 4 ) t e c h n i q u e s . T h e p h y s i c o - c h e m i c a l p a r a m e t e r s o f t h e w a t e r w e r e s t u d i e d b y t h e m e t h o d o f A P H A ( 1 9 8 1 ) . T h e o b s e r v a t i o n s w e r e m a d e u n d e r l o w a n d h i g h p o w e r m i c r o s c o p i c l e v e l s . O B S E R V A T I O N S A N D R E S U L T S T h e p h y s i c o - c h e m i c a l c h a r a c t e r s o f w a t e r u s e d f o r h o l d i n g t h e g a s t r o p o d s h a d t e m p e r a t u r e b e t w e e n 2 6 - 2 8 0 C , p H 7 . 1 t o 7 . 3 , t o t a l h a r d n e s s 1 4 0 t o 1 5 0 p p m a n d o x y g e n c o n t e n t o f 5 . 6 t o 7 m l / l i t . T h e L C 5 0 v a l u e s o f i m m a t u r e a s w e l l a s m a t u r e s n a i l s w e r e c a l c u l a t e d a t 2 4 , 4 8 , 7 2 a n d 9 6 h o u r s o f e x p o s u r e s , t o p e s t i c i d e s e n d o s u l f a n , n u v a c r a n , c y m b u s h a n d s e v i n . S u m m a r i z e d i n 0 5 1 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2

T a b l e 1 . A s f a r a s a g e r e l a t e d m o r t a l i t y i s c o n c e r n e d i m m a t u r e s n a i l s w e r e m o r e r e s i s t a n t t o p e s t i c i d e s a s c o m p a r e d t o m a t u r e s n a i l s . W h i l e a s s e s s i n g t h e L C 5 0 o f p e s t i c i d e s f o r 2 4 h o u r s a f f e c t e d b y t h e t e m p e r a t u r e , p H , s a l i n i t y a n d p h o t o p e r i o d o n s n a i l s , w e r e r e c o r d e d i n t h e T a b l e 2 . A s s e s s i n g t h e e f f e c t o f t e m p e r a t u r e o n t h e s n a i l s e x p o s e d t o p e s t i c i d e s e n d o s u l f a n , n u v a c r a n , c y m b u s h a n d s e v i n f o r 2 4 h o u r s i t w a s s e e n t h a t a n i n c r e a s e i n t e m p e r a t u r e r e s u l t e d i n i n c r e a s i n g t h e m o r t a l i t y r a t e i n a l l a b o v e f o u r p e s t i c i d e s . S i m i l a r l y i n c r e a s e i n p H a n d s a l i n i t y , i n c r e a s e d m o r t a l i t y o f s n a i l s . O n e v a l u a t i n g t h e e f f e c t s o f p h o t o p e r i o d o n s n a i l s e x p o s e d t o e n d o s u l f a n , n u v a c r a n , c y m b u s h a n d s e v i n i t w a s r e v e a l e d t h a t 8 L : 1 6 D c a u s e d m a x i m u m m o r t a l i t y f o l l o w e d b y 1 2 L : 1 2 D . T h u s i n c r e a s i n g d a r k p e r i o d c a u s e d i n c r e a s e d m o r t a l i t y . H o w e v e r , 0 L : 2 4 D d i d n o t s h o w m o r t a l i t y r a t e h i g h e r t h a n 8 L : 1 6 D . T h i s m a y b e b e c a u s e s n a i l s r e m a i n e d a c t i v e f o r o n l y a l i m i t e d p e r i o d a c c o r d i n g t o t h e i r c i r c a d i a n r h y t h m a n d e v e n w h e n d a r k n e s s w a s p r e v a i l i n g f o r 2 4 h o u r s , t h e y d i d n o t c h a n g e t h e i r r h y t h m b e y o n d a c e r t a i n l i m i t . I n o r d e r t o i n v e s t i g a t e d i f f e r e n t t y p e o f c e l l s p r e s e n t w i t h i n t h e c e n t r a l n e r v o u s s y s t e m o f s n a i l , T h i a r a l i n e a t a t h e g a n g l i o n i c r i n g w a s s e c t i o n e d a n d s t a i n e d w i t h M a l l o r y s t r i p l e s t a i n i n g t e c h n i q u e . T h e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s a r e q u i t e d i s t i n c t f r o m t h e n o r m a l n e u r a l c e l l s . T h e r e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s b i g g e r w i t h c o n s p i c u o u s n u c l e i a n d l a r g e a m o u n t o f c y t o p l a s m . T h e p e r i k a r y a a n d a x o n i c A c e l l s a r e l o a d e d w i t h f i n e p a r t i c l e s , s t a i n e d d i s t i n c t l y . T h e s e s t a i n i n g p e c u l i a r i t i e s a r e c h a r a c t e r i s t i c f e a t u r e s o f n e u r o s e c r e t o r y c e l l s ( S c h a r r e r a n d S c h a r r e r , 1 9 5 4 ) a n d t h u s d i f f e r e n t i a t e t h e m f r o m t h e n o r m a l n e u r a l c e l l s . O n t h e b a s i s o f t h e i r m o r p h o l o g i c a l f e a t u r e s l i k e s h a p e , s i z e , v a c u o l i z a t i o n , s t a i n a b i l i t y e t c . , t h e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s o f T . l i n e a t a c o u l d b e c l a s s i f i e d i n t o t w o m a i n t y p e s ( 1 ) A c e l l s o r A x o n i c c e l l s a n d ( 2 ) B c e l l s o r n o n - a x o n i c c e l l s . T h e s e c e l l s w e r e o b s e r v e d i n c e r e b r a l , b u c c a l , p l e u r a l , p a r i e t a l , a n d v i s c e r a l g a n g l i a a n d m o r e g e n e r a l l y a r r a n g e d i n p e r i p h e r y a n d a t t h e c e n t r e a l u m e n , n e u r o p i l e . T h e e x t r e m e p e r i p h e r y a n d g a n g l i a i s s u p p o s e d t o b e t h e n e u r o h a e m a l r e g i o n a s b e i n g o b s e r v e d t o b e v a c u o l a t e d . T h e n u m b e r , s i z e a n d s h a p e o f t h e s e a l s o m a y v a r y f r o m g a n g l i o n . T h e c h a r a c t e r i s t i c s o f t h e s e c e l l s a r e g i v e n i n t h e T a b l e 3 . C e l l t y p e A : T h e s e c e l l s a r e p y r i f o r m i n s h a p e a n d h a v e l o n g a x o n s . T h e l e n g t h o f t h e c e l l b o d y i s r a n g i n g f r o m 9 t o 1 6 µ i n l e n g t h . T h e n u c l e u s i s o v a l m e a s u r i n g a b o u t 3 t o 6 µ i n d i a m e t e r a n d h a s o n e l a r g e n u c l e o l u s . T h e n u c l e u s m a y b e e i t h e r c e n t r a l o f e c c e n t r i c i n p o s i t i o n . T h e s i z e a n d t h e n u m b e r a r e c o m p a r a t i v e l y s m a l l e r t h a n B c e l l s . G e n e r a l l y t h e y l i e t o w a r d s t h e p e r i p h e r a l r e g i o n o f t h e g a n g l i a . T h e n u c l e u s g e n e r a l l y b e a r s s i n g l e n u c l e o l u s . T h e c y t o p l a s m i c p o r t i o n o f t h e c e l l c o n s i s t s o f a c o l l o i d a l n e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l s t a i n e d d e e p b l u e w i t h M a l l o r y t r i p l e s t a i n i n g a n d c o n t a i n s f e w v a c u o l a r s p a c e s . T h e n e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l s a r e e l a b o r a t e d b y t h e s e c e l l s . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 0 5 2 A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2 N a m e o f t h e P e s t i c i d e D u r a t i o n o f E x p o s u r e i n h o u r s L C 5 0 o f I m m a t u r e S n a i l s i n p p m L C 5 0 o f M a t u r e S n a i l s i n p p m E n d o s u l p h a n ( O r g a n o c h l o r i n e ) 2 4 0 . 0 2 8 0 . 0 1 1 8 2 4 8 0 . 0 1 6 0 . 0 0 3 6 0 7 2 0 . 0 0 3 0 . 0 0 1 3 4 9 6 0 . 0 0 2 0 . 0 0 0 1 4 2 N u v a c r a n ( O r g a n o p h o s p h a t e ) 2 4 0 . 0 3 8 0 . 0 2 8 8 0 4 8 0 . 0 2 7 0 . 0 1 4 8 0 7 2 0 . 0 1 6 0 . 0 1 1 1 2 9 6 0 . 0 1 3 0 . 0 0 8 8 3 4 C y m b u s h ( S y n t h e t i c P y r e t h r o i d ) 2 4 0 . 0 4 7 0 . 0 2 8 1 1 3 4 8 0 . 0 3 2 0 . 0 2 2 4 4 7 2 0 . 0 2 8 0 . 0 2 0 7 8 9 6 0 . 0 2 3 0 . 0 1 9 6 1 5 S e v i n ( C a r b a m a t e ) 2 4 4 1 . 3 7 3 0 . 6 8 3 5 4 8 2 1 . 4 7 8 . 4 3 9 4 7 2 1 5 . 4 7 6 . 1 6 8 8 9 6 0 9 . 0 2 4 . 5 6 3 8 T a b l e : 1 : A g e r e l a t e d m o r t a l i t y o f T . l i n e a t a e x p o s e d t o p e s t i c i d e s :

A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2 0 5 3 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 C e l l t y p e B : T h e s e c e l l s a r e o v a l o r r o u n d i n s h a p e m e a s u r i n g a b o u t 4 t o 7 . 5 µ i n d i a m e t e r . T h e n u c l e i a r e r o u n d o r o v a l m e a s u r i n g 1 . 5 t o 3 µ i n d i a m e t e r a n d m a y b e e i t h e r a t t h e c e n t r e o r e c c e n t r i c i n p o s i t i o n . T h e s e c e l l s a r e c h a r a c t e r i z e d b y t h e i n t e n s i v e s t a i n i n g o f t h e c y t o p l a s m i c g r a n u l e s . T h e g r a n u l e s a r e o b s e r v e d i n c l u m p s a n d s t a i n f a i n t r e d w i t h M a l l o r y s t r i p l e s t a i n . T h e s e c e l l s a r e m o r e c o m m o n a s c o m p a r e d t o c e l l t y p e A a n d a r e s c a t t e r e d i n a l l t h e r e g i o n s o f t h e g a n g l i a . T a b l e 3 r e p r e s e n t s s o m e d i s t i n c t p r o p e r t i e s o f a l l t y p e A a n d B c e l l s . D I S C U S S I O N T h e e v a l u a t i o n o f a g e r e l a t e d m o r t a l i t y r e v e a l e d t h a t t h e i m m a t u r e s n a i l s w e r e m o r e r e s i s t a n t t o t h e a c t i o n o f p e s t i c i d e s u s e d v i z . e n d o s u l p h a n , n u v a c r a n , c y m b u s h a n d s e v i n a s c o m p a r e d t o m a t u r e s n a i l s . T h i s f a c t i s m a i n l y d u e t o t h e a b s o r p t i v e s o l e s u r f a c e ( G o d a n , 1 9 8 3 ) , S i m i l a r l y s e a s o n a l L C 5 0 v a r i a t i o n s i n P a r a t o x e x p o s e d f r e s h w a t e r s n a i l , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s ( M a g a r e , a n d K u l k a r n i , 1 9 9 5 ) . T h e p r e s e n t i n v e s t i g a t i o n r e p o r t s t h a t d u r i n g L C 5 0 e x p o s u r e s e v e r a l s p e c i e s o f a q u a t i c s n a i l s h a v e b e e n u s e d a s b i o a s s a y f o r a v a r i e t y o f t o x i c s u b s t a n c e s a n d a b r o a d r a n g e o f s e n s i t i v i t y h a s b e e n o b s e r v e d . A l l i s o n ( 1 9 7 8 ) e x p r e s s e d i n C u r r e n t t r e n d s i n t o x i c o l o g i c a l r e s e a r c h t h a t p r o g r e s s i n t o x i c o l o g y h a s r e q u i r e d t h e c o m b i n e d a c t i v i t y o f c h e m i s t s w h o h a v e p u r i f i e d a n d c h a r a c t e r i z e d t o x i c s u b s t a n c e a n d e l e c t r o p h y s i o l o g i s t s , m o l e c u l a r b i o l o g i s t s , a n d o t h e r w h o h a v e d e f i n e d t h e i r p r e c i s e m o d e o f a c t i o n . T h e f a c t o r s a f f e c t i n g t h e t o x i c i t y o f a p a r t i c u l a r p e s t i c i d e a r e t h e a n i m a l w e i g h t ( P i c k e r i n g e t a l . , 1 9 6 2 ) i t s d e v e l o p m e n t a l s t a g e C h a r a c t e r i s t i c s / D e s c r i p t i o n s C e l l t y p e A C e l l t y p e B D i s t r i b u t i o n M o s t l y a l o n g t h e p e r i p h e r a l r e g i o n , l e s s i n n u m b e r S c a t t e r e d i n a l l t h e r e g i o n s o f t h e g a n g l i o n a b u n d a n t i n n u m b e r S h a p e o f t h e c e l l b o d y P y r i f o r m O v a l L a r g e s t d i a m e t e r o f t h e c e l l b o d y 1 6 u m 7 . 5 u m N u c l e u s L o b e d o r r o u n d e d R o u n d e d N a t u r e o f s e c r e t a r y m a t e r i a l C o l l o i d a l G r a n u l a r i n c l u s t e r s V a c u o l e s A b s e n t A b s e n t S t a i n i n g r e a c t i o n o f c y t o p l a s m D a r k b l u e a n d r e d w i t h M a l l o r y s t r i p l e s t a i n s . B l u e b l a c k a n d f a i n t r e d w i t h M a l l o r y s t r i p l e s t a i n s . T a b l e : 3 : M o r p h o l o g i c a l C h a r a c t e r i s t i c o f n e u r o s e c r e t o r y c e l l t y p e A a n d B f o u n d i n t h e c e r e b r a l g a n g l i o n o f T . l i n e a t a P h y s i c o - C h e m i c a l P a r a m e t e r s P e s i t i c i d e s u s e d E n d o s u l p h a n N u v a c r o n S e v i n c y m b u s h T e m p e r a t u r e 0 C 2 5 5 0 5 0 5 0 5 0 3 0 6 7 . 5 0 5 8 6 5 . 0 0 6 7 . 5 0 3 5 8 7 . 5 0 6 0 . 5 0 7 5 . 0 0 7 7 . 5 0 p H 7 . 5 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 8 5 7 . 0 0 6 2 . 0 0 7 2 . 0 0 7 2 . 0 0 8 . 5 7 4 . 0 0 7 2 . 0 0 8 0 . 0 0 8 1 . 0 0 S a l i n i t y . 0 3 % 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 5 0 . 0 0 . 0 4 % 6 5 . 5 0 6 7 . 5 0 7 1 . 5 0 6 6 . 0 0 . 0 5 % 8 0 . 5 0 8 1 . 5 0 7 8 . 0 0 7 4 . 0 0 P h o t o p e r i o d L i g h t / d a r k h o u r s 0 L - 2 4 D 5 5 . 0 0 5 3 . 0 0 5 5 . 0 0 5 6 . 0 0 8 L - 1 6 D 6 5 . 0 0 6 9 . 0 0 6 5 . 0 0 7 1 . 0 0 1 2 L - 1 2 D 6 0 . 0 0 6 8 . 0 0 6 0 . 0 0 6 5 . 0 0 1 6 L - 8 D 5 1 . 5 0 5 1 . 5 0 5 2 . 0 0 5 0 . 0 0 2 4 L - 0 D 3 7 . 5 0 3 9 . 0 0 3 5 . 0 0 3 8 . 0 0 T a b l e : 2 : E f f e c t o f P h y s i c o - C h e m i c a l P a r a m e t e r s o n t h e P e r c e n t m o r a l i t y o f T . l i n e a t a e x p o s e d t o L C 5 0 d o s e o f p e s t i c i d e s f o r 2 4 h o u r s .

( K a m a l d e e p a n d T o o r , 1 9 7 7 ) , t i m e s o f e x p o s u r e a n d t e m p e r a t u r e ( M a c e k e t a l . , 1 9 6 9 ) , p H a n d h a r d n e s s o f w a t e r ( H a n d e r s o n e t a l . , 1 9 6 0 ) E f f e c t o f s a l i n i t y ( N a g a b h u s h a n a m a n d M u l e y , 1 9 7 6 ) . I t i s a w e l l k n o w n f a c t t h a t t h e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s c o n t r o l t h e p h y s i o l o g i c a l p r o c e s s e s l i k e r e p r o d u c t i o n a n d e x p o s u r e o f a n i m a l s t o p e s t i c i d e s i n t e r f e r e w i t h t h e n o r m a l f u n c t i o n a l p r o c e s s a n d u l t i m a t e l y c r e a t e a n i m b a l a n c e i n t h e n o r m a l s y s t e m . U t k a r ( 1 9 8 2 ) h a s f o u n d t h e t o x i c e f f e c t o f c o p p e r s u l p h a t e o n t h e n e u r o s e c r e t i o n a n d h a s r e p o r t e d a d e c r e a s e i n a l l n u m b e r c e l l a n d a l l n u c l e a r a r e a , d e p l e t i o n o f n e u r o s e c r e t o r y c e l l s o f t h e f r e s h w a t e r s n a i l , V i v i p a r o u s b e n g a l e n s i s . H e a l s o r e p o r t e d t h a t e f f e c t o f b i o g e n i c a m i n e s ( r e s e r p i n e a n d e s p e r p i n e ) o n n e u r o s e c r e t o r y c e l l s a n d o b s e r v e d t h a t t h e s i z e o f b o t h n e u r o s e c r e t o r y c e l l s ( A a n d B ) w a s r e d u c e d . B o d h a n k a r ( 1 9 8 4 ) o b s e r v e d t h a t t h e r e w a s a n d e c r e a s e i n n e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l i n b o t h A a n d B t y p e s o f c e l l s n u m b e r o f c e l l t y p e s a n d n u c l e a r a r e a s o f t h e s e c e l l s o f t h e s l u g , L a e v i c a u l i s a l t e o n e x p o s u r e t o f i v e d i f f e r e n t m o l l u s c i c i d e s , v i z . M a l a t h i o n , h y g r o , T i o d o n , S e v i m o l , a n d C o p p e r J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 0 5 4 A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2 E x p o s u r e p e r i o d C e l l s l o a d e d w i t h n e u r o s e c r e t o r y m a t e r i a l ( N S M ) C e l l t y p e A C e l l t y p e B C o n t r o l 2 2 + 2 5 6 + 2 1 D a y 2 1 + 1 4 9 + 3 7 D a y s 1 5 + 2 3 8 + 4 1 4 D a y s 1 2 + 4 3 4 + 8 T a b l e : 4 : V a r i a t i o n s i n t h e n u m b e r o f s t a i n a b l e n e u r o s e c r e t o r y c e l l s p r e s e n t i n c e r e b r a l g a n g l i o n o f T . l i n e a t a o n e x p o s u r e t o S e v i n . A ) C o n t r o l B ) 1 D a y C ) 7 D a y s D ) 1 4 D a y s F i g : A , B , C , D : T . S . o f B r a i n o f T h i a r a l i n e a t a a f t e r e x p o s u r e o f S e v i n o n N e u r o s e c r e t o r y c e l l s .

s u l p h a t e . B h a t l a w a n d e ( 1 9 8 9 ) h a s r e p o r t e d s i m i l a r p h e n o m e n o n i n t h e s n a i l , C e r a s t u s m o u s s o n i a n u s . I n t h e p r e s e n t i n v e s t i g a t i o n o n e x p o s u r e o f S e v i n i t w a s o b s e r v e d t h a t t h e r e w a s a n a c u t e c e l l u l a r d e g e n e r a t i o n , v a c u o l i z a t i o n a n d p r o n o u n c e d d e c r e a s e i n t h e c e l l n u m b e r i n c e r e b r a l g a n g l i o n o f T h i a r a l i n e a t a . T h e s e r e s u l t s a r e i n a g r e e m e n t w i t h t h e r e s u l t o f R e d d y ( 1 9 8 2 ) , U t k a r ( 1 9 8 2 ) , B o d h a n k a r ( 1 9 8 4 ) , B h a t l a w a n d e ( 1 9 8 9 ) . R E F E R E N C E S A l l i s o n A C . 1 9 7 8 . C u r r e n t t r e n d s i n T o x i c o l o g i c a l r e s e a r c h . P r o c . I . I n t r e r . C o n g r e s s o n T o x i c o l . ( E d s . P l a a a n d D u n c a n ) 3 8 7 - 4 0 2 . A P H A A W W A a n d W P C F . 1 9 8 1 . S t a n d a r d m e t h o d s f o r t h e e x a m i n a t i o n o f w a t e r a n d w a s t e w a t e r 1 5 t h e d i t i o n , A m e r i c a n p u b l i c H e a l t h A s s o c i a t i o n , W a s h i n g t o n . B a k e r H . 1 9 2 5 . A n a t o m y o f H a n d e r s o n i a P r o c . A c a d . N a t u r . S c i . , 7 7 B h a t l a w a n d e S B . 1 9 8 9 . E f f e c t o f p e s t i c i d e e x p o s u r e o n e c o b i o l o g y a n d l a n d s n a i l , C e r r a s t u s m o u s s o n i o u s P h . D . T h e s i s , D r . B . A . M . U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d , I n d i a . B o d h a n k a r D S . 1 9 8 4 . E f f e c t s o f p e s t i c i d e s o n s o m e e c o p h y s i o l o g i c a l a s p e c t s o f t h e l a n d s l u g , L a e v i c a u l i s a l t e . P h . D . T h e s i s , D r . B . A . M . U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d , I n d i a . C h a u d h a r i R a v i n d r a D a n d K u l k a r n i A B . 1 9 9 3 . E f f e c t o f m o n o c r o t o p h o s o n t h e p r o t e i n m e t a b o l i s m o f a t e r r e s t r i a l s n a i l , Z o o t e c u s i n s u l a r i s . J . E c o t o x i c o l . E n v i r o n . M o u n i t . , 3 ( 2 ) : 1 5 7 - 1 5 9 C h a u d h a r i T R , P a t i l P N , R a o K R , D e s h m u k h S B a n d D i w a t e S G . 1 9 9 9 . E f f e c t o f p e s t i c i d e r o g o r o n s o m e b i o c h e m i c a l c o n s t i t u e n t s i n f r e s h w a t e r s n a i l , T h i a r a l i n e a t a . E n v i r o n m e n t a n d E c o l o g y 1 7 ( 1 ) : 1 4 6 - 1 4 8 . C r o f t s D . 1 9 2 9 . H a l l i o t i s . P r o c . T r a n s . L i v e r f o o l . B i o l . S o c . M e m . , 2 9 F i n n e y D J . 1 9 7 1 . P r o b i t A n a l y s i s . C a m b r i d g e u n i v e r s i t y P r e s s L o n d o n . G o d a n D . 1 9 8 3 . P e s t s l u g a n d s n a i l s , B i o l o g y a n d C o n t r o l . S p i n g e r V e r l a q B e r l i n H e i d e l b e r g , N e w Y o r k . H a n d e r s o n C , D e c k r i n g O H a n d T r a z e w e l l C M . 1 9 6 0 . T r a n s 2 n d S e m i n a r o n B i o l . P r o b l e m s i n w a t e r p o l l . R . A . T a b t . S a m i t , E n g . C e n t e r 7 6 . * K a m a l d e e p K a n d T o o r H S . 1 9 7 7 . I n d . J . E x p . B i o l . , 1 5 : 1 9 3 . * M a c e k K J , H u t c h i n s o n C a n d C o p e O B . 1 9 6 9 . B u l l . E n v i o r n . C o n t a m . T o x i c o l . , 4 : 1 7 4 . M a g a r e S R . 1 9 9 1 . E n d o c r i n e r e g u l a t i o n s i n a t e r r e s t r i a l s n a i l , C e r r a s t u s m o u s s o n i a n u s . P h . D . T h e s i s , D r . B A M U , A u r a n g a b a d . M a g a r e S R a n d K u l k a r n i A B . 1 9 9 5 . E f f e c t o f p a r a d o x o n t h e b r a i n n e u r o s e c r e t o r y p r o f i l e o f t h e s n a i l C e r a s t u s m o u s s o n i a n u s , B u l l . A s s . Z o o l . , 2 ( 1 ) : 4 7 - 5 1 . M a l l o r y F . 1 9 4 4 . P h y s i o l o g i c a l t e c h n i q u e s , P h i l a d e l p h i a , W . B . S a u n d e r s , C o . M o r t a n J E . 1 9 5 6 . E v a l u a t i o n o f P e r r i s s o d o n a t a a n d T y l o s p o r i a T r a n s . R e y . S o c . , 8 3 : 5 1 5 - 5 2 4 . M u l e y E V . 1 9 7 4 . B i o l o g y o f t h e s n a i l , M e l a n i a s c a b r a . P h . D . T h e s i s , M a r a t h w a d a U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d . N a g a b h u s h a n a m R a n d M u l e y E V . 1 9 7 6 . N e u r o s e c r e t o r y p h e n o m e n a i n t h e f r e s h w a t e r p r o s o b r a n c h , M e l a n i a S c a b r a . N a t u r a l S c i e n c e J o u r n a l M a r a t h w a d a U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d , V o l . X V S c i . , 8 : 2 2 1 - 2 2 4 . N a g a b h u s h a n a m R a n d K u l k a r n i A B . 1 9 7 1 . N e u r o s e c r e t i o n i n t h e l a n d s l u g , L a e v i c a u l i s a l t e . P r o c . I n d i a n A c a d . S c i . , 7 3 : 2 9 0 - 3 0 2 . P a t i l H Z a n d M a h a l e P N . 2 0 1 0 . T o x i c i t y e f f e c t o f m e r c u r y c h l o r i d e o n t h e f r e s h w a t e r G a s t r o p o d , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s . J o u r n a l o f E c o b i o t e c h n o l o g y , V o l - 2 / 8 : 2 1 - 2 4 . P a t i l P N , R a o K R , S a s a n e S R , V e d p a t h a k A N , S h e j u l e K S a n d C h a u d h a r i T R . 1 9 9 3 . I m p a c t o f Z o l o n e o n t h e o r g a n i c c o n s t i t u e n t s o f t h e f r e s h w a t e r g a s t r o p o d , T h i a r a l i n e a t a f r o m P a n z a r a r i v e r a t D h u l e . P r o c . A c a d . E n v i r o n . B i o l . , 2 ( 2 ) : 1 9 3 - 1 9 7 . P a t i l V T , K u l k a r n i A B a n d S h i n d e S V . 1 9 9 1 . S e a s o n a l L C 5 0 v a r i a t i o n s i n m o n o c h r o t o p h o s e x p o s e d s n a i l , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s . J . E c o t o x i c o l 0 5 5 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2

E n v i r o n . M o u n t . , 1 ( 4 ) : 3 2 1 - 3 2 4 . * P i c k e r i n g O H , H a n d e r s o n C a n d L e m k e A E . 1 9 6 2 . T r a n s . A m . F i s h . S o c . , 9 1 : 1 7 5 . R e d d y T S . 1 9 8 2 . S t u d i e s o n s e x u a l b i o l o g y o f C a r i d i n a w e b e r i . P h . D . T h e s i s , D r . B a b a s a h e b A m b e d k a r M a r a t h w a d a U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d . S c h a r r e r E a n d S c h a r r e r B . 1 9 5 4 . N e u r o s e c r e t i o n M o l l e n d r o f f s H o o c h M i k r . A n a n t . 6 : 9 5 3 - 1 0 6 6 , S p r i n g e r , B e r l i n . S h i n d e S V . 1 9 9 1 . N e u r o e n d o c r i n o l o g y a n d r e p r o d u c t i v e p h y s i o l o g y o f a f r e s h w a t e r s n a i l , I n d o p l a n o r b i s e x u s t u s ( D e s h a y e s ) P h . D . T h e s i s , D r . B A M U , A u r a n g a b a d , I n d i a . V a n D e r S c h a l i e H a n d D u n d e e D . 1 9 5 6 . M o r p h o l o g y o f P o m a t i o p s i s c i n c i n n a t i e s i s . O c c . P a . M u s . Z o o . U n i v . M i c h i g a n . 5 7 6 . U t k a r V N . 1 9 8 2 . T h e s t u d i e s o n e n d o c r i n e m e c h a n i s m s i n g a s t r o p o d m o l l u s k s . P h . D . T h e s i s , D r . B a b a s a h e b A m b e d k a r M a r a t h w a d a U n i v e r s i t y , A u r a n g a b a d , I n d i a . U t k a r V N a n d K u l k a r n i A B . 2 0 0 0 . E f f e c t o f h e a v y m e t a l s o n n e u r o s e c r e t o r y c e l l s o f a f r e s h w a t e r P r o s o b r a n c h s n a i l , B a l l a m y a b e n g a l i e n s i s . E n v i r o n m e n t a l I s s u e s a n d S u s t a i n a b l e D e v e l o p m e n t V i n i t P u b l i c a t i o n s , A u r a n g a b a d . 1 0 - 1 2 . ( * O r i g i n a l n o t r e f e r r e d . ) . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 1 : 0 5 0 - 0 5 6 0 5 6 A h i r r a o e t a l . , 2 0 1 2 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t F i c u s p u b l i s h e r s . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g O p e n A c c e s s a n d Q u i c k s p r e a d i n g Y o u r e t a i n s y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ f i c u s p u b l i s h e r s . c o m w w w . f i c u s p u b l i s h e r s . c o m / s u b m i t 1 . a s p x .