J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y P e a n u t O i l C a k e : A N o v e l S u b s t r a t e f o r E n h a n c e d C e l l G r o w t h a n d P r o d i g i o s i n P r o d u c t i o n f r o m S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 K e y w o r d s : S e r r a t i a m a r c e s c e n s , r e d p i g m e n t , p r o d i g i o s i n , p e a n u t o i l c a k e , f e r m e n t a t i o n . A B S T R A C T : D i f f e r e n t a g r o - w a s t e s s u c h a s p e a n u t o i l c a k e ( P O C ) , c o c o n u t o i l c a k e ( C O C ) , s e s a m e o i l c a k e ( S O C ) , s a f f l o w e r s e e d o i l c a k e ( S F O C ) a n d c o t t o n s e e d o i l c a k e ( C S O C ) w e r e s c r e e n e d f o r p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n t h r o u g h f e r m e n t a t i o n e m p l o y i n g S e r r a t i a m a r c e s c e n s - C F - 5 3 . P O C w a s h i g h l y b e n e f i c i a l f o r t h e p i g m e n t p r o d u c t i o n . F e r m e n t a t i o n p a r a m e t e r s h a v e b e e n s t a n d a r d i z e d ; m a x i m u m a m o u n t o f p i g m e n t w a s o b t a i n e d ( ~ 4 0 m g m l - 1 ) i n P O C e x t r a c t a t 3 0 o C f o r 4 2 h u s i n g 8 % i n o c u l u m d e n s i t y ( 1 X 1 0 7 c e l l / m l ) c o m p a r e d t o P G b r o t h ( 1 4 . 2 m g m l - 1 ) . T h e p i g m e n t y i e l d w a s a l m o s t t h r e e f o l d h i g h e r t h a n t h a t o f t h e P G b r o t h . U s e o f P O C e x t r a c t a s a r a w m a t e r i a l f o r p i g m e n t p r o d u c t i o n c o u l d b e o f g r e a t c o m m e r c i a l s i g n i f i c a n c e . T h i s r e p o r t a p p e a r s t o b e t h e f i r s t o n e o n p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n u s i n g P O C a s a s u b s t r a t e . 5 4 9 - 5 5 7 | J R B | 2 0 1 2 | V o l 2 | N o 6 T h i s a r t i c l e i s g o v e r n e d b y t h e C r e a t i v e C o m m o n s A t t r i b u t i o n L i c e n s e ( h t t p : / / c r e a t i v e c o m m o n s . o r g / l i c e n s e s / b y / 2 . 0 ) , w h i c h g i v e s p e r m i s s i o n f o r u n r e s t r i c t e d u s e , n o n - c o m m e r c i a l , d i s t r i b u t i o n a n d r e p r o d u c t i o n i n a l l m e d i u m , p r o v i d e d t h e o r i g i n a l w o r k i s p r o p e r l y c i t e d . w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A u t h o r s : C h a n d r a s h e k h a r N a i k 1 , S r i s e v i t a J M 1 , S h u s h m a K N 1 , F a r a h N o o r i n 1 , S h i l p a A C 1 , M u t t a n n a C D 1 , D a r s h a n N , S a n n a d u r g a p p a D 2 . I n s t i t u t i o n : 1 . M i c r o b i o l o g y a n d D o w n s t r e a m P r o c e s s i n g L a b o r a t o r y , D e p a r t m e n t o f B i o t e c h n o l o g y , S i r M V i s v e s v a r a y a I n s t i t u t e o f T e c h n o l o g y , Y a l a h a n k a , B a n g a l o r e - 5 6 2 1 5 7 . 2 . C e n t r e f o r S u s t a i n a b l e T e c h n o l o g i e s , I n d i a n I n s t i t u t e o f S c i e n c e ( I I S c ) , B a n g a l o r e - 5 6 0 0 1 2 . C o r r e s p o n d i n g a u t h o r : C h a n d r a s h e k h a r N a i k . E m a i l : c k n a i k g @ g m a i l . c o m P h o n e N o : + 9 1 - 0 8 0 - 2 8 4 6 7 2 4 8 . F a x : + 9 1 - 0 8 0 - 2 8 4 6 7 0 8 1 . W e b A d d r e s s : h t t p : / / j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / d o c u m e n t s / R A 0 2 5 1 . p d f . D a t e s : R e c e i v e d : 0 2 J u n 2 0 1 2 A c c e p t e d : 1 6 J u l 2 0 1 2 P u b l i s h e d : 0 3 A u g 2 0 1 2 A r t i c l e C i t a t i o n : C h a n d r a s h e k h a r N a i k , S r i s e v i t a J M , S h u s h m a K N , F a r a h N o o r i n , S h i l p a A C , M u t t a n n a C D , D a r s h a n N , S a n n a d u r g a p p a D . P e a n u t O i l C a k e : A N o v e l S u b s t r a t e f o r E n h a n c e d C e l l G r o w t h a n d P r o d i g i o s i n P r o d u c t i o n f r o m S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 . J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y O r i g i n a l R e s e a r c h J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l A n I n t e r n a t i o n a l S c i e n t i f i c R e s e a r c h J o u r n a l

I N T R O D U C T I O N : T h e i n t e r e s t i n p r o d i g i o s i n a n d p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t s h a s b e e n o n t h e i n c r e a s e d u e t o t h e b i o l o g i c a l a c t i v i t i e s o f t h e s e c o m p o u n d s . T h e p i g m e n t p r o d i g i o s i n , a n a l k a l o i d c o m p o u n d , h a s a n t i b a c t e r i a l , a n t i f u n g a l , a n t i m a l a r i a l , a n t i p r o l i f e r a t i v e a n d i m m u n o s u p p r e s s i v e p r o p e r t i e s ( M o n t a n e r a n d T o m a s , 2 0 0 1 ; S o t o e t a l . , 2 0 0 4 ) . I t a l s o i n d u c e s a p o p t o s i s i n c e r t a i n c a n c e r c e l l s ( F u r s t n e r , 2 0 0 3 ; P e r e z e t a l . , 2 0 0 3 ) . T h i s s e c o n d a r y m e t a b o l i t e i s p r o d u c e d b y s e v e r a l m i c r o o r g a n i s m s l i k e S e r r a t i a , P s e u d o m o n a s , S t r e p t o m y c e s a n d c e r t a i n m a r i n e b a c t e r i a ( G e r b e r , 1 9 7 5 ; G i r i e t a l . , 2 0 0 4 ) t h r o u g h q u o r u m s e n s i n g ( F u q u a e t a l . , 1 9 9 6 ; W e i e t a l . , 2 0 0 6 ) . T h e n a t u r a l l y o c c u r r i n g p r o d i g i o s i n a n d p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t s e x i s t i n c y c l i c a n d a c y c l i c f o r m s a n d c o n t a i n 4 m e t h o x y - 2 , 2 b i p y r o l e r i n g ( M a n d e r v i l l e , 2 0 0 1 ) . P r o d i g i o s i n , i t s e l f a n a c y c l i c f o r m , c o n t a i n s a 2 m e h t y l - 3 - p e n t y l - p y r r o l e r i n g . T h e c y c l i c f o r m s i n c l u d e m e t a c y c l o p r o d i g i o s i n , n o n y l p r o d i g i o s i n , s t r e p t o r u b i n B a n d c y c l o p r o d i g i o s i n ( M a n d e r v i l l e , 2 0 0 1 ) . T h e g r a m n e g a t i v e S e r r a t i a m a r c e s c e n s a r e p r o l i f i c p r o d u c e r s o f r e d p i g m e n t ( R u s t o m e t a l . , 1 9 9 0 ) . F r o m a n i n d u s t r i a l p o i n t o f v i e w a n d b e c a u s e o f i t s b i o l o g i c a l p o t e n t i a l i t i e s , t h e r e i s a n e c e s s i t y t o d e v e l o p a h i g h t h r o u g h p u t a n d c o s t - e f f e c t i v e b i o p r o c e s s f o r l a r g e s c a l e p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n . E a r l i e r w o r k e r s h a v e r e p o r t e d m a n y d i f f e r e n t i a l , s e l e c t i v e a n d s y n t h e t i c m e d i a s u c h a s , n u t r i e n t b r o t h , p e p t o n e g l y c e r o l b r o t h ( P G B ) , L B b r o t h e t c , ( M o n t a n e r e t a l . , 2 0 0 0 ; H a d d i x a n d W e r n e r , 2 0 0 0 ) f o r p r o d i g i o s i n a n d p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t p r o d u c t i o n . T h e y i e l d o f t h e p i g m e n t i s v a r y i n g : 3 g L - 1 ( C a n g e t a l . , 2 0 0 0 ) i n c o r p o r a t i n g e t h a n o l i n t h e m e d i u m , 1 5 2 m g l - 1 ( W e i a n d C h e n , 2 0 0 5 ) i n L B b r o t h a n d o i l s u p p l e m e n t s , a n d 0 . 0 8 g - 4 . 2 8 g L - 1 e m p l o y i n g d i f f e r e n t c a r b o n a n d n i t r o g e n s o u r c e s ( M i n - J u n g - S o n g e t a l . , 2 0 0 5 ) . G i r i e t a l , ( 2 0 0 4 ) o b t a i n e d 1 7 t o 3 9 g L - 1 y i e l d a n d o p i n e d p e a n u t a n d s e s a m e p o w d e r a n d t h e i r o i l s t o b e g o o d s u b s t r a t e s f o r p r o d i g i o s i n b i o s y n t h e s i s . O u r e a r l i e r w o r k s o n c i t r i c a c i d p r o d u c t i o n h a d r e v e a l e d t h a t t h e s o m e a g r o w a s t e s c o u l d b e b e n e f i c i a l l y e m p l o y e d t o e n h a n c e c i t r i c a c i d p r o d u c t i o n ( L i n g a p p a e t a l . , 2 0 0 2 ) . I t w a s , h e n c e , c o n s i d e r e d w o r t h w h i l e t o a t t e m p t e n h a n c i n g p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n u s i n g s u c h a g r o - w a s t e s . T h e p e a n u t c a k e s o b t a i n e d a f t e r e x t r a c t i o n o f o i l a r e a t b e s t u s e d a s a c a t t l e f e e d s u p p l e m e n t a t i o n . O u r e a r l i e r s t u d i e s h a d r e v e a l e d t h e p r e s e n c e o f s u f f i c i e n t s u g a r a n d f a t c o n t e n t i n t h e s e c a k e s . H o w e v e r , n o a t t e m p t s a p p e a r t o h a v e b e e n m a d e t o u s e t h e s e a g r o - w a s t e s f o r p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n . H e n c e , t h e p r e s e n t w o r k w a s u n d e r t a k e n t o e v a l u a t e p r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n a n d p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t s e m p l o y i n g S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 . M A T E R I A L S A N D M E T H O D S M i c r o o r g a n i s m a n d c u l t u r a l c o n d i t i o n s A r e d c o l o r p i g m e n t p r o d u c i n g b a c t e r i a l s t r a i n w a s i s o l a t e d f r o m s o i l s n e a r d a i r y i n d u s t r y w a s t e d i s p o s a l p o i n t s i n a n d a r o u n d B a n g a l o r e a n d i d e n t i f i e d a s S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 a n d d e p o s i t e d a t M i c r o b i a l T y p e C u l t u r e C o l l e c t i o n a n d G e n e B a n k ( M T C C ) , C h a n d i g a r h , I n d i a ( A c c e s s i o n N o . M T C C 7 6 4 3 ) . S u b c u l t u r i n g a n d m a i n t e n a n c e w a s o n p e p t o n e g l y c e r o l a g a r ( P G A ) s l a n t s . S e e d c u l t u r e o f S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 t o b e u s e d a s i n o c u l a f o r t h e e x p e r i m e n t a l w o r k w a s m a i n t a i n e d i n P G b r o t h . S c r e e n i n g o f s u b s t r a t e s a n d c u l t u r e m e d i u m D i f f e r e n t a g r o - b a s e d s u b s t r a t e s , t h e p e a n u t o i l c a k e ( P O C ) , t h e c o c o n u t o i l c a k e ( C O C ) , t h e s e s a m e o i l c a k e ( S O C ) , t h e s a f f l o w e r s e e d o i l c a k e ( S F O C ) a n d t h e c o t t o n s e e d o i l c a k e ( C S O C ) w e r e o b t a i n e d f r o m l o c a l m a r k e t i n B a n g a l o r e a n d p o w d e r e d . T o 1 0 0 m l w a t e r , 5 g o f e a c h c a k e p o w d e r w a s s e p a r a t e l y a d d e d a n d b o i l e d f o r 3 0 m i n a n d a l l o w e d t o c o o l . T h e s u p e r n a t a n t w a s f u r t h e r c e n t r i f u g e d a t 7 0 0 0 r p m f o r 1 5 m i n t o o b t a i n a d e b r i s - f r e e s o l u t i o n . T o t h e c l a r i f i e d s o l u t i o n , a g a r w a s a d d e d ( 1 5 - 2 0 g L - 1 ) a f t e r d u e a d j u s t m e n t o f p H t o 7 . 0 a n d a u t o c l a v e s t e r i l i z e d a t 1 2 1 ° C f o r 2 0 m i n . T h e a g a r p l a t e s N a i k e t a l . , 2 0 1 2 5 5 0 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7

t h e n p r e p a r e d w e r e e m p l o y e d i n p r e l i m i n a r y s c r e e n i n g s t u d i e s t o e v a l u a t e a s t o w h i c h s u b s t r a t e w a s m o s t s u i t a b l e f o r p r o d i g i o s i n a n d p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t b y S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 . A f t e r t h e p r e l i m i n a r y s c r e e n i n g t h e p e a n u t c a k e w a s s i m i l a r l y p r o c e s s e d a n d t h e m e d i a w i t h o u t a g a r s e r v e d a s t h e s u b s t r a t e a n d P G b r o t h a s t h e c o n t r o l f o r t h e p i g m e n t p r o d u c t i o n . T h e f l a s k s w e r e i n o c u l a t e d w i t h 0 . 5 m l o f ( 1 X 1 0 7 c e l l s / m l ) 2 4 h c e l l s u s p e n s i o n o f S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 a n d i n c u b a t e d a t 3 0 ° C i n a n o r b i t a l s h a k e r a t 2 0 0 r p m f o r 4 8 h . T h e i n i t i a l i n o c u l u m w a s 2 % t o a v o i d c o l o r a t i o n o f t h e s t a r t e r c u l t u r e i n t h e b e g i n n i n g o n l y . E f f e c t o f b i o t i c a n d a b i o t i c p a r a m e t e r s T o s t a n d a r d i z e t h e c u l t u r e p a r a m e t e r s f o r b i o m a s s y i e l d a n d p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n , t h e e f f e c t o f v a r y i n g p H , t e m p e r a t u r e , i n c u b a t i o n p e r i o d , i n o c u l u m s i z e , s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n a s w e l l a s s u p p l e m e n t a t i o n o f d i f f e r e n t c a r b o h y d r a t e s , n i t r o g e n s o u r c e s , s a l t s a n d m e t a l i o n s w e r e s t u d i e d . T h e p r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n b y S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 i s v e r y s e n s i t i v e ; t h e r e f o r e , t h e s e l e c t e d p a r a m e t e r s w e r e o p t i m i z e d t o a c h i e v e h i g h e r y i e l d o f p r o d i g i o s i n . O n c e a f e r m e n t a t i o n p a r a m e t e r w a s o p t i m i z e d , t h e o p t i m u m l e v e l o f t h a t p a r a m e t e r w a s e m p l o y e d i n t h e s u b s e q u e n t s t u d i e s w h e r e i n a n o t h e r p a r a m e t e r w a s t o b e o p t i m i z e d . Q u a n t i f i c a t i o n o f P r o d i g i o s i n C u l t u r e b r o t h ( 1 m l ) w a s m i x e d v i g o r o u s l y w i t h 3 m l o f m e t h a n o l i n a v o r t e x m i x e r a n d t h e n c e n t r i f u g e d a t 5 0 0 0 r p m f o r 5 m i n u t e s . A n a m o u n t o f 0 . 8 m l s u p e r n a t a n t w a s f u r t h e r m i x e d w i t h 0 . 2 m l o f a c i d i f i e d m e t h a n o l . T h e o p t i c a l d e n s i t y o f t h e r e s u l t i n g s o l u t i o n w a s m e a s u r e d a s p e r W e i a n d C h e n ( 2 0 0 5 ) . D r y c e l l w e i g h t d e t e r m i n a t i o n C e l l c o n c e n t r a t i o n w a s d e t e r m i n e d b y m e a s u r i n g t h e d r y c e l l w e i g h t ( D C W ) . C u l t u r e b r o t h w a s f i l t e r e d t h r o u g h a w a s h e d a n d p r e w e i g h e d m i c r o p o r e f i l t e r ( 0 . 2 µ m ) . T h e c e l l - l o a d e d f i l t e r w a s d r i e d a t 1 0 5 ° C a n d r e w e i g h e d t o d e t e r m i n e c e l l b i o m a s s ( W e i a n d C h e n , 2 0 0 5 ) . P u r i f i c a t i o n o f p i g m e n t f o r M a s s S p e c t r o s c o p i c a n a l y s i s S . m a r c e s c e n s - C F 5 3 g r o w n i n P O C e x t r a c t w a s c e n t r i f u g e d a t 1 0 0 0 0 r p m f o r 2 0 m i n u t e s a n d t h e c e l l b i o m a s s w a s c o l l e c t e d . T h e p i g m e n t f r o m t h e b i o m a s s w a s e x t r a c t e d w i t h a c i d i f i e d m e t h a n o l ( 1 N H C l 1 m l : m e t h a n o l 2 4 m l ) a n d t h e e x t r a c t w a s c e n t r i f u g e d a t 5 0 0 0 r p m f o r 1 5 m i n . T h e s u p e r n a t a n t w a s c o n c e n t r a t e d i n v a c u u m e v a p o r a t o r a t 6 0 ° C t o o b t a i n c r u d e p i g m e n t . T h e c r u d e c o n c e n t r a t e d p i g m e n t w a s d i s s o l v e d i n m e t h a n o l a n d t h e s o l u t i o n w a s p a s s e d t h r o u g h h e x a n e b a l a n c e d s i l i c a g e l ( m e s h 6 0 - 1 2 0 ) c o l u m n . T h e t r a p p e d p i g m e n t w i t h i n t h e c o l u m n w a s e l u t e d w i t h 1 0 M e t h y l a c e t a t e t o l i b e r a t e t h e a d s o r b e d p i g m e n t . F u r t h e r , e l u t e w a s h a r v e s t e d a n d d r i e d i n a v a c u u m d r i e r a t 6 0 o C t o o b t a i n t h e p u r i f i e d p r o d u c t . S m a l l f r a c t i o n s o f t h e p i g m e n t w e r e c o l l e c t e d a n d s i l i c a g e l t h i n l a y e r c h r o m a t o g r a p h y ( T L C ) w a s p e r f o r m e d u s i n g t h e c h l o r o f o r m / m e t h a n o l / w a t e r ( 8 0 : 1 5 : 0 5 v / v ) a s s o l v e n t s y s t e m . F r a c t i o n s h a v i n g s i n g l e r e d s p o t w i t h R f v a l u e o f 0 . 7 2 w e r e p o o l e d a n d t h e s o l v e n t w a s e v a p o r a t e d . P o o l e d s a m p l e s w e r e d i s s o l v e d i n m e t h a n o l f o r m o l e c u l a r m a s s d e t e r m i n a t i o n b y E S I - M S ( M i n - J u n g - S o n g , e t a l . , 2 0 0 5 ) . S c a l e u p s t u d i e s i n B i o r e a c t o r T h e f e r m e n t a t i o n s w e r e c a r r i e d o u t i n a 2 L l a b s c a l e b i o r e a c t o r ( S a r t o r i u s B - L i t e , I n d i a ) e q u i p p e d w i t h a p H , t e m p e r a t u r e a n d D O e l e c t r o d e . T h e f e r m e n t a t i o n w a s s t a r t e d a f t e r i n o c u l a t i n g 2 4 h s e e d c u l t u r e o f t h e S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F 5 3 ( 8 % v / v ) i n t o t h e P O C e x t r a c t b r o t h . F e r m e n t a t i o n s w e r e c o n d u c t e d u n d e r t h e c o n d i t i o n o f t e m p e r a t u r e 3 0 o C , a i r f l o w r a t e o f 2 v v m w i t h a n a g i t a t i o n s p e e d o f 2 0 0 r p m a n d i n i t i a l p H 7 . 0 , u n l e s s m e n t i o n e d o t h e r w i s e . T h e w o r k i n g v o l u m e w a s 1 L w i t h f o a m l e v e l c o n t r o l l e d b y a u t o m a t i c a d d i t i o n o f 1 % a n t i f o a m ( m i n e r a l o i l ) . C u l t u r e p H w a s c o n t r o l l e d b y u s i n g 2 . 5 N H C L a n d 2 . 5 N N a O H a s a n d w h e n r e q u i r e d . S a m p l e s w e r e d r a w n p e r i o d i c a l l y t o e s t i m a t e t h e y i e l d o f N a i k e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 5 5 1

p r o d i g i o s i n . R E S U L T S A N D D I S C U S S I O N T h e r e s u l t s o f t h e s t u d i e s r e g a r d i n g p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n b y S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 e m p l o y i n g d i f f e r e n t s u b s t r a t e s a r e p r e s e n t e d i n F i g u r e 1 . T h e r i c h n e s s o f t h e p i g m e n t a n d i t s p r o d u c t i o n w a s o b s e r v e d t o b e m a x i m u m i n P O C m e d i u m . V a r i a t i o n i n t h e c o l o r o f t h e p i g m e n t p r o d u c e d i n d i f f e r e n t s u b s t r a t e s c o u l d b e d u e t o t h e c o m p o s i t i o n s o f t h e e x t r a c t s o f d i f f e r e n t s u b s t r a t e s . T h e r e f o r e , P O C e x t r a c t m e d i u m w a s t h e p r e f e r r e d c h o i c e - m e d i u m t o c a r r y o u t s y s t e m a t i c i n v e s t i g a t i o n s o n m e d i u m i m p r o v e m e n t a n d p r o c e s s o p t i m i z a t i o n f o r t h e h i g h e r y i e l d o f p r o d i g i o s i n b y S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 . E f f e c t o f p H M a x i m u m y i e l d o f t h e p i g m e n t w a s o b t a i n e d a t p H 7 i n P O C a n d t h e c o n t r o l P G b r o t h g r o w t h m e d i a ( F i g . 2 A ) , 1 4 . 2 m g / m l a n d 8 . 5 m g / m l r e s p e c t i v e l y . T h u s t h e p i g m e n t y i e l d i n P O C w a s a l m o s t 1 . 6 t i m e s t h a t i n P G b o t h . I t h a s b e e n r e p o r t e d t h a t t h e s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s a r e g e n e r a l l y p r o d u c e d i n t h e p H r a n g e o f 6 - 8 ( S o l e e t a l . , 1 9 9 7 ) . D i f f e r e n c e s i n t h e y i e l d w o u l d d e p e n d o n m e d i u m c o m p o s i t i o n . P G b r o t h c o n t a i n s p e p t o n e a n d y e a s t e x t r a c t a s n i t r o g e n s o u r c e a n d g l y c e r o l a s c a r b o n s o u r c e a n d t h u s l a c k s a d i r e c t s o u r c e o f c a r b o n ( W e i e t a l . , 2 0 0 5 ) . O n t h e o t h e r h a n d , P O C e x t r a c t n a t u r a l l y i n h e r i t s o i l a s i t s c a r b o n s o u r c e a n d b a s i c a l l y c o n t a i n s s a t u r a t e d a n d u n s a t u r a t e d f a t t y a c i d s , c a r b o h y d r a t e s , m i n e r a l s , v i t a m i n s e t c . E f f e c t o f t e m p e r a t u r e T h e r e s u l t s o f t h e i n f l u e n c e o n g r o w t h a n d p i g m e n t p r o d u c t i o n b y S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 a r e p r e s e n t e d i n F i g . 2 B . P r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n a n d c e l l d r y w e i g h t w a s m a x i m u m a t 3 0 ° C i n b o t h t h e P O C e x t r a c t b r o t h ( 1 8 . 2 m g m l - 1 a n d c e l l d r y w e i g h t 3 5 . 2 m g m l - 1 , r e s p e c t i v e l y ) a n d t h e P G b r o t h ( 1 0 . 2 m g m l - 1 a n d c e l l d r y w e i g h t 2 3 . 5 m g m l - 1 , r e s p e c t i v e l y ) . T h e i n c r e a s e i s a l m o s t 1 . 7 t i m e s i n p i g m e n t y i e l d a n d 1 . 4 t i m e s i n c e l l g r o w t h i n P O C b r o t h w h e n c o m p a r e d t o t h o s e i n t h e P G b r o t h . I n c a s e o f P G b r o t h , t h e v i s c o s i t y o f g l y c e r o l d e c r e a s e s a t t h i s t e m p e r a t u r e l e a d i n g t o i n c r e a s e d a c c e s s i b i l i t y o f t h e N a i k e t a l . , 2 0 1 2 5 5 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 F i g 1 . G r o w t h a n d p i g m e n t p r o d u c t i o n p r o f i l e o f S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 o n d i f f e r e n t s u b s t r a t e s . ( a ) C O C e x t r a c t a g a r ; ( b ) S O C e x t r a c t a g a r ; ( c ) P O C e x t r a c t a g a r ; ( d ) P G A ; ( e ) S F O C e x t r a c t a g a r a n d ( f ) C S O C e x t r a c t a g a r F i g 2 . E f f e c t o f p H , t e m p e r a t u r e a n d i n c u b a t i o n t i m e o n p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n b y S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 ; ( ) P i g m e n t i n P O C e x t r a c t ; ( ) p i g m e n t i n P G b r o t h ; ( Δ ) C e l l g r o w t h i n P O C e x t r a c t ; ( ) C e l l g r o w t h i n P G b r o t h

c a r b o n s o u r c e t o t h e m i c r o o r g a n i s m ( G i r i e t a l . , 2 0 0 4 ) . P i g m e n t p r o d u c t i o n w a s t o t a l l y b l o c k e d a t 4 0 ° C i n P G b r o t h ( o n p a r w i t h t h e r e p o r t o f G i r i e t a l . , 2 0 0 4 ) a n d a t 4 2 o C i n t h e P O C b r o t h . T h e i m p a c t o f p h y s i o l o g i c a l r o l e o f t e m p e r a t u r e i n b l o c k i n g p r o d i g i o s i n s y n t h e s i s s e e m s t o v a r y w i t h m e d i u m s o f d i f f e r e n t s u b s t r a t e c o m p o s i t i o n ( G i r i e t a l . , 2 0 0 4 ) . E f f e c t o f i n c u b a t i o n p e r i o d I n c u b a t i o n p e r i o d p l a y s a v e r y i m p o r t a n t r o l e i n t h e p r o d u c t i o n o f b a c t e r i a l s e c o n d a r y m e t a b o l i t e s . I n c u b a t i o n p e r i o d v a r i e d i n t h e r a n g e o f 6 t o 6 0 h . P i g m e n t p r o d u c t i o n c o m m e n c e d f r o m 8 t h h i n P G b r o t h , w h i l e t h e s a m e s t a r t e d f r o m 1 0 t h h o f g r o w t h i n P O C m e d i u m ( F i g . 2 C ) a n d i t w a s l i n e a r f r o m 1 8 t h t o 4 2 n d h i n c a s e o f P O C b r o t h a n d f r o m 1 2 t h t o 3 6 t h h i n c a s e o f P G b r o t h , t h e m a x i m u m y i e l d s b e i n g 2 8 . 6 m g m l - 1 a n d d r y c e l l w e i g h t 4 5 . 8 m g m l - 1 i n t h e P O C b r o t h a n d t h e s a m e b e i n g ~ 1 3 m g m l - 1 a n d 2 5 . 6 m g m l - 1 r e s p e c t i v e l y i n P G b r o t h . T h i s i s a l m o s t a 2 . 2 f o l d i n c r e a s e i n p i g m e n t y i e l d i n P O C w h e n c o m p a r e d t o i t s y i e l d i n t h e P G b r o t h . T h e e a r l y o n s e t o f p i g m e n t p r o d u c t i o n i n P G b r o t h a p p e a r s t o b e d u e t o i t s r i c h n i t r o g e n s o u r c e s . P G b r o t h c o n t a i n s p e p t o n e , m e a t a n d b e e f e x t r a c t s w h i c h a r e d i g e s t s o f p l a n t o r a n i m a l p r o t e i n s a n d g l y c e r o l i s t h e c a r b o n s o u r c e ( G i r i e t a l . , 2 0 0 4 ) . T h e P O C b r o t h o n t h e o t h e r h a n d i s a c o m p l e x a n d u n d e f i n e d n u t r i e n t s o u r c e o f s a t u r a t e d a n d u n s a t u r a t e d f a t t y a c i d s y i e l d i n g c a r b o n , p r o t e i n s , m i n e r a l s , v i t a m i n s a n d h e n c e , t h e d e l a y i n p i g m e n t p r o d u c t i o n o n s e t m i g h t h a v e b e e n c a u s e d . E f f e c t o f i n o c u l u m d e n s i t y L o w e r i n i t i a l i n o c u l a i n b o t h t h e b r o t h s l e d t o l o w e r p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n w h e n c o m p a r e d w i t h h i g h e r i n i t i a l i n o c u l a ( F i g . 3 A ) . P i g m e n t p r o d u c t i o n w a s m a x i m u m w i t h 8 % i n i t i a l i n o c u l u m d e n s i t y . I t w a s 3 6 . 2 m g m l - 1 i n P O C b r o t h a n d o n l y 1 4 . 2 m g m l - 1 i n P G b r o t h , a l m o s t 2 . 6 f o l d p i g m e n t p r o d u c t i o n b e i n g o b s e r v e d i n P O C b r o t h . P i g m e n t e x p r e s s i o n m a i n l y d e p e n d s u p o n q u o r u m s e n s i n g p h e n o m e n o n ( F u q u a e t a l . , 1 9 9 6 ) . G r o w t h i n l i q u i d c u l t u r e a t l o w c e l l d e n s i t y a l l o w s l o w l e v e l e x p r e s s i o n o f a m e m b r a n e N a i k e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 5 5 3 F i g 3 . E f f e c t o f i n o c u l u m s i z e a n d s u b s t r a t e ( P O C ) c o n c e n t r a t i o n o n g r o w t h a n d p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n b y S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 ; A , ( ) P i g m e n t i n P O C e x t r a c t ; ( ) p i g m e n t i n P G b r o t h ; ( ) C e l l g r o w t h i n P O C e x t r a c t ; ( Δ ) C e l l g r o w t h i n P G b r o t h : B , ( ) p i g m e n t i n P G b r o t h ; ( ) C e l l g r o w t h i n P O C e x t r a c t . F i g 4 . E l e c t r o s p r a y I o n i z a t i o n M a s s s p e c t r o m e t r y ( E S I - M S ) s h o w s t h e p r o d i g i o s i n i s o l a t e d f r o m S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 h a s m o l e c u l a r w e i g h t o f 3 2 5 . 2 0 D a .

p e r m e a b l e p o s i t i v e r e g u l a t o r o f p r o d i g i o s i n e x p r e s s i o n . T h e i n t r a c e l l u l a r c o n c e n t r a t i o n o f t h e r e g u l a t o r r e m a i n s l o w a t l o w c e l l d e n s i t y d u e t o i t s d i f f u s i o n a c r o s s t h e c e l l m e m b r a n e a f t e r s y n t h e s i s . H o w e v e r , a s t h e c e l l d e n s i t y i n c r e a s e s , t h e i n t r a c e l l u l a r c o n c e n t r a t i o n o f r e g u l a t o r i n c r e a s e s t o a t h r e s h o l d n e e d e d f o r q u i c k e r a c t i v a t i o n o f p r o d i g i o s i n e x p r e s s i o n ( H a d d i x a n d W e r n e r , 2 0 0 0 ) . E f f e c t o f s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n S u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n t o o i n f l u e n c e s t h e p r o d u c t i o n o f p i g m e n t a n d b i o m a s s ( F i g . 3 B ) . M a x i m u m p i g m e n t p r o d u c t i o n w a s o b s e r v e d a t 8 % ( w / v ) o f P O C e x t r a c t . B u t w i t h h i g h e r s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n s , b i o m a s s p r o d u c t i o n a l o n e w a s b e n e f i t e d , n o t p i g m e n t p r o d u c t i o n . P r o b a b l y h i g h e r s u b s t r a t e c o n c e n t r a t i o n s s u p p r e s s p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n . T h e p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n w a s 3 9 . 8 m g m l - 1 i n P O C b r o t h c o m p a r e d t o P G b r o t h ( 1 4 . 2 m g m l - 1 ) i n 4 2 h , a l m o s t 2 . 8 t i m e s i n P O C m e d i u m t h a n i n P G b r o t h . E f f e c t o f c a r b o h y d r a t e s a n d N i t r o g e n o u s s o u r c e s V a r y i n g p r o d u c t i o n s o f p i g m e n t a n d b i o m a s s c o u l d b e o b t a i n e d i n P G b r o t h a m e n d e d w i t h d i f f e r e n t c a r b o n s o u r c e s . Y e t , m a x i m u m p i g m e n t a n d b i o m a s s p r o d u c t i o n w e r e o b t a i n e d i n P O C m e d i u m a l o n e , w i t h o u t a n y s u p p l e m e n t a r y a d d i t i o n s o f c a r b o n s o u r c e s ( T a b l e 1 ) . S u p p l e m e n t i n g d i f f e r e n t c a r b o n s o u r c e s t o P G b r o t h y i e l d e d i n t e r e s t i n g r e s u l t s ; i n m a n y i n s t a n c e s , t h e r e i s n o c o r r e l a t i o n b e t w e e n b i o m a s s y i e l d a n d p i g m e n t p r o d u c t i o n . G l u c o s e a p p e a r e d t o i n h i b i t p i g m e n t p r o d u c t i o n , p r o b a b l y b y c a t a l y t i c r e p r e s s i o n o r l o w e r i n g t h e m e d i a p H a s a l s o o b s e r v e d b y S o l e e t a l . , ( 1 9 9 7 ) ; h e n c e t h e u s e o f g l y c e r o l a s g l u c o s e a l t e r n a t i v e i n P G b r o t h t o s u p p o r t p r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t s N a i k e t a l . , 2 0 1 2 5 5 4 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 T a b l e 1 . E f f e c t o f c a r b o n s o u r c e o n c e l l g r o w t h a n d p i g m e n t p r o d u c t i o n b y S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 C a r b o n s o u r c e C e l l d r y w e i g h t ( m g m l - 1 ) P i g m e n t ( m g m l - 1 ) N o c a r b o n 2 0 . 0 0 1 . 0 0 G l u c o s e 2 1 . 0 0 1 . 5 8 G a l a c t o s e 2 2 . 9 8 3 . 1 0 F r u c t o s e 2 3 . 0 0 6 . 1 5 S u c r o s e 2 5 . 0 0 3 . 1 6 L a c t o s e 2 1 . 3 0 6 . 1 4 M a l t o s e 2 3 . 1 0 5 . 1 5 M a n i t o l 2 3 . 3 3 3 . 6 0 M a l i b i o s e 1 9 . 8 0 0 . 0 9 R a f i n o s e 1 5 . 6 0 0 . 0 4 X y l o s e 1 6 . 6 0 0 . 0 4 C e l l o b i o s e 1 4 . 2 0 0 . 1 0 A r b i n o s e 1 0 . 9 8 0 . 1 0 R h a m n n o s e 1 9 . 8 6 1 . 1 3 S o l u b l e s t a r c h 2 9 . 0 8 1 1 . 5 0 C o r n s t a r c h 3 5 . 5 0 1 0 . 0 0 P o t a t o s t a r c h 3 7 . 6 0 1 3 . 0 8 R i c e s t a r c h 3 7 . 0 8 1 2 . 0 0 P O C e x t r a c t 6 2 . 8 0 3 9 . 8 0 M e d i u m P G b r o t h : 1 0 g c a r b o n s o u r c e , 1 0 g B a c t o p e p t o n e , 1 0 g B e e f e x t r a c t , 2 g K 2 H P O 4 l - 1 , 2 g N a C l , 1 0 m l g l y c e r o l i n 1 l d i s t i l l e d w a t e r a d j u s t e d t o p H 7 a n d i n c u b a t e d i n i n c u b a t o r s h a k e r a t 2 0 0 r p m a t 2 8 o C f o r 4 8 h . T w o b a t c h e s o f g r o w t h w e r e a n a l y z e d i n r e p l i c a t e s . F i g 5 . S c a l e u p s t u d i e s i n b i o r e a c t o r w i t h P O C m e d i u m b y S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3

( M o n t a n e r e t a l . , 2 0 0 0 , B a e e t a l . , 2 0 0 1 ) . T h o u g h t r y p t o n e , y e a s t e x t r a c t a n d s o y b e a n m e a l a m o n g t h e v a r i o u s n i t r o g e n s o u r c e s i n d u c e d b e t t e r p i g m e n t a n d b i o m a s s p r o d u c t i o n t h a n t h e P G b r o t h , t h e y w e r e n o t e v e n h a l f o f t h o s e o b s e r v e d w i t h P O C m e d i u m a l o n e ( T a b l e 2 ) . T h e s e r e s u l t s s u p p o r t s i m i l a r o b s e r v a t i o n s o f W e i a n d C h e n ( 2 0 0 5 ) . V a r i o u s s a l t s ( N a C l , K C l , N a N O 3 , N a 2 S O 4 , C H 3 C O O N a ) a t 1 % ( w / v ) a s w e l l a s m e t a l i o n s ( C u S O 4 , C o C l 2 , F e S O 4 , M n S O 4 , Z n S O 4 , M g S O 4 a n d C a C l 2 ) a t 0 . 1 % ( w / v ) i n h i b i t e d p i g m e n t p r o d u c t i o n ( d a t a n o t s h o w n ) , t h u s s u p p o r t i n g t h e o b s e r v a t i o n s o f M e l v i n a n d E l a i n e ( 1 9 7 3 ) . D e t e r m i n a t i o n o f m o l e c u l a r m a s s b y E S I - M S T h e p u r i f i e d p i g m e n t f r o m t h e c u l t u r e b r o t h w a s a n a l y z e d b y E S I - M S ( F i g u r e 4 ) . O n e m a j o r p e a k w a s o b s e r v e d ; i t s s i g n a l a t 3 2 5 . 2 0 m a t c h e s t h e m o l e c u l a r w e i g h t o f p r o d i g i o s i n ( M o n t a n e r a n d T o m a s , 2 0 0 1 ) . T h e r e f o r e , t h e p i g m e n t o b t a i n e d i n t h i s p r e s e n t s t u d y i s a s c e r t a i n e d t o b e p r o d i g i o s i n , t h e s a m e r e d p i g m e n t p r o d u c e d b y S e r r a t i a s p p . a n d S t r e p t o m y c e s s p p . ( G e r b e r , 1 9 7 5 ) . S c a l e u p s t u d i e s i n b i o r e a c t o r C o n d i t i o n s f o r c e l l g r o w t h a n d p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n i n E h r l e n m e y e r f l a s k s b e c o m e l i m i t e d d u e t o s u b s t r a t e c o n s u m p t i o n a s w e l l a s m e t a b o l i t e a c c u m u l a t i o n . T h e r e f o r e , s t u d i e s w e r e c a r r i e d o u t i n t h e b i o r e a c t o r e m p l o y i n g t h e b i o t i c a n d a b i o t i c p a r a m e t e r s a l r e a d y s t a n d a r d i z e d h i t h e r t o ( F i g . 5 ) T h e m a x i m u m a m o u n t o f p r o d i g i o s i n r e c o v e r e d w a s ~ 4 0 m g m l l - 1 a n d d r y c e l l w e i g h t w a s 6 5 . 2 m g m l - 1 ( d a t a n o t s h o w n ) . T h i s y i e l d a p p e a r s t o b e ~ 3 f o l d h i g h e r t h a n t h a t r e p o r t e d b y B a e e t a l . , ( 2 0 0 1 ) w h o e m p l o y e d n o v e l i n t e g r a t e d b i o r e a c t o r w i t h i n t e r n a l a b s o r b e n t r e s i n s . H o w e v e r , M i n - j u n g - S o n g e t a l . , ( 2 0 0 5 ) r e p o r t e d t h a t r e s i n s e x h i b i t i n h i b i t o r y e f f e c t s o n p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n . I n t h e p r e s e n t s t u d y , n e i t h e r i n t e r n a l n o r e x t e r n a l a d s o r b e n t s w e r e e m p l o y e d ; y e t h i g h l e v e l s o f p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n s c o u l d b e a c h i e v e d u s i n g c o n v e n t i o n a l b a t c h f e r m e n t a t i o n p r o c e s s . C O N C L U S I O N T h e p r e s e n t s t u d y h a s r e v e a l e d t h e f e a s i b i l i t y o f a c o s t - e f f e c t i v e f e r m e n t a t i o n s t r a t e g y t h a t c a n l e a d t o e n h a n c e d p r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n p i g m e n t e m p l o y i n g S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 . F u r t h e r , t h e s i g n i f i c a n c e o f t h e p r e s e n t s t u d y i s t h a t a n e c o n o m i c a l l y c h e a p a n d e a s i l y a v a i l a b l e b y p r o d u c t c a n b e u s e d , w i t h o u t a n y e x t e r n a l a d d i t i o n o f n u t r i e n t s ( s u g a r s , p r o t e i n s , m i n e r a l s e t c . ) f o r p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n u s i n g p e a n u t o i l c a k e a s s u b s t r a t e f o r f e r m e n t a t i o n . S t u d i e s a r e i n p r o g r e s s f o r l a r g e s c a l e p i g m e n t p r o d u c t i o n e m p l o y i n g S e r r a t i a m a r c e s c e n s C F - 5 3 u s i n g p e a n u t o i l c a k e a s t h e s u b s t r a t e . A C K N O W L E D G E M E N T T h e a u t h o r s w i s h t o t h a n k t h e S r i K r i s h n a d e v a r a y a E d u c a t i o n T r u s t ( K E T ) f o r f i n a n c i a l s u p p o r t i n e x e c u t i n g t h i s p r o j e c t . W e w o u l d a l s o l i k e t o N a i k e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 5 5 5 T a b l e 2 . E f f e c t o f n i t r o g e n s o u r c e o n c e l l g r o w t h a n d p i g m e n t p r o d u c t i o n b y S . m a r c e s c e n s C F - 5 3 N i t r o g e n s o u r c e C e l l d r y w e i g h t ( m g m l - 1 ) P i g m e n t ( m g m l - 1 ) N o n i t r o g e n 0 . 0 0 0 . 0 0 Y e a s t e x t r a c t ( Y E ) 2 4 . 5 6 8 . 1 2 S o y b e a n m e a l 3 5 . 4 1 1 4 . 1 2 C a s - a m i n o a c i d s ( C A S ) 2 6 . 2 2 1 0 . 8 8 T r y p t o n e 2 4 . 5 2 9 . 8 7 U r e a 1 3 . 2 3 4 . 0 1 D r i e d y e a s t 2 3 . 2 9 6 . 0 5 N H 4 N O 3 1 4 . 7 0 2 . 0 3 N H 4 C l 1 3 . 1 5 0 . 0 1 N H 4 S O 4 1 4 . 2 0 0 . 0 2 P O C e x t r a c t 6 2 . 8 2 3 9 . 8 0 M e d i u m P G b r o t h : ( s e e T a b l e - 1 ) w a s u s e d w h i c h c o n t a i n e d a n i n d i c a t e d n i t r o g e n s o u r c e ( 2 0 g l - 1 ) i n p l a c e o f B a c t o p e p t o n e a n d B e e f e x t r a c t . T w o b a t c h e s o f g r o w t h w e r e a n a l y z e d i n r e p l i c a t e s .

e x p r e s s o u r s i n c e r e t h a n k s t o D r . H . G . N a g e n d r a a n d D r . P . M . N i m b a r g i f o r t h e i r a d v i c e d u r i n g m a n u s c r i p t p r e p a r a t i o n . R E F E R E N C E S : B a e J , M o o n H , O h K K , K i m C H , L e e D S , K i m S W , H o n g S L . 2 0 0 1 . A n o v a l b i o r e a c t o r w i t h a n i n t e r n a l a d s o r b e n t f o r i n t e g r a t e d f e r m e n t a t i o n a n d r e c o v e r y o f p r o d i g i o s i n - l i k e p i g m e n t p r o d u c e d f r o m S e r r a t i a s p . K H - 9 5 , B i o t e c h n o l . L e t t . 2 3 : 1 3 1 5 - 1 3 1 9 . B e a t r i z M o n t a n e r , R i c a r d o P e r e z - T o m a s . 2 0 0 1 . P r o d i g i o s i n - i n d u c e d a p o p t o s i s i n h u m a n c o l o n c a n c e r c e l l s , L i f e s c i e n c e s 6 8 : 2 0 2 5 - 2 0 3 6 . C a n g S , S a n a n d a M , J o h d o O , O h t a , S , N a g a m a t s u Y , Y o s h i m o t o A . 2 0 0 0 . H i g h p r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n b y S e r r a t i a m a r s c e c e n s g r o w n o n e t h a n o l . B i o t e c h n o l . L e t t . 2 2 : 1 7 6 1 - 1 7 6 5 . D A o u s t J Y , G e r b e r N N . 1 9 7 4 . I s o l a t i o n a n d p u r i f i c a t i o n o f p r o d i g i o s i n f r o m V i b r i o p s y c h r o e r y t h r u s . J . B a c t e r i o l . , 1 1 8 : 7 5 6 - 7 5 7 . F u r s t n e r A . 2 0 0 3 . C h e m i s t r y a n d b i o l o g y o f r o s e o p h i l i n a n d t h e p r o d i g i o s i n a l k a l o i d s : a s u r v e y o f t h e l a s t 2 5 0 0 y e a r s . A n g e w . C h e m . I n t . E d . , 4 2 : 3 5 8 2 - 3 6 0 3 . F u q u a C , W i n a n s S C , G r e e n b e r g E P , 1 9 9 6 . C e n s u s a n d c o n s e n s u s i n b a c t e r i a l e c o s y s t e m : t h e L u x R - L u x I f a m i l y o f q u o r u m - s e n s i n g t r a n s c r i p t i o n a l r e g u l a t o r s . A n n u . R e v . M i c r o b i o l . , 5 0 : 7 2 7 - 7 5 1 . G e r b e r N N . 1 9 7 5 . P r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t s . C R C C r i t . R e v . M i c r o b i o l . , 3 : 4 6 9 - 4 8 5 . G i r i A V , A n a n d k u m a r N , M u t h u k u m a r a n G , P e n n a t h u r G . 2 0 0 4 . A n o v e l m e d i u m f o r t h e e n h a n c e d c e l l g r o w t h a n d p r o d u c t i o n o f p r o d i g i o s i n f r o m S e r r a t i a m a r c e s c e n s i s o l a t e d f r o m s o i l . B M C M i c r o b i o l . , 4 : 1 - 1 0 . H a d d i x P L a n d W e r n e r T F . 2 0 0 0 . S p e c t r o p h o t o m e t r i c a s s a y o f g e n e e x p r e s s i o n ; S e r r a t i a m a r c e s c e n s p i g m e n t a t i o n . B i o s c e n e , 2 6 ( 4 ) : 3 - 1 2 L i n g a p p a K , C h a n d r a s h e k h a r N a i k , V i v e k B a b u C S , R a m a k r i s h n a D , V e n k a t a r e d d y M . 2 0 0 2 . A N o v e l s u b s t r a t e f o r c i t r i c a c i d p r o d u c t i o n u n d e r s o l i d s t a t e f e r m e n t a t i o n . I n d i a n J o u r n a l o f M i c r o b i o l o g y 4 2 : 3 4 7 - 3 4 9 . M a n d e r v i l l e R A . 2 0 0 1 . S y n t h e s i s , p r o t o n a f f i n i t y a n d a n t i c a n c e r p r o p e r t i e s o f t h e p r o d i g i o s i n - g r o u p n a t u r a l p r o d u c t s . C u r r . M e d i c i n a l C h e m . , 1 ( 2 ) : 1 9 5 - 2 1 8 . M e l v i n P S , E l a i n e F M . 1 9 7 3 . E f f e c t o f i r o n a n d s a l t o n p r o d i g i o s i n s y n t h e s i s i n S e r r a t i a m a r c e s c e n s . J . B a c t e r i o l . , 1 1 4 ( 3 ) : 9 9 - 1 0 0 6 M i n - J u n g S o n g , J u n g d o n B a e , D a e S i l L e e , C h a n g - H o K i m , S e u n g - W o o k K i m , S u k - I n H o n g . 2 0 0 6 . P u r i f i c a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f p r o d i g i o s i n p r o d u c e d b y i n t e g r a t e d b i o r e a c t o r f r o m S e r r a t i a s p . K H - 9 5 . J . B i o s c . B i o e n g . , 1 0 1 : 1 5 7 - 1 6 1 . M o n t a n e r B , N a v a r r o S , P i q u e M , V i l a s c a M , M a r t i n e l l M , G i r a l t E , G i l J , P e r e z - T o m a s R . 2 0 0 0 . P r o d i g i o s i n f r o m t h e s u p e r n a t a n t o f S e r r a t i a m a r c e s c e n s i n d u c e a p o p t a s i s i n h a e m a t o p o i e t i c c a n c e r c e l l l i n e s . B r . J . P h a r m o c o l . , 1 3 1 : 5 8 5 - 5 9 3 . M o n t a n e r B , P e r e z - T h o m a s R . 2 0 0 1 . P r o d i g i o s i n i n d u c e d a p o p t o s i s i n h u m a n c o l o n c a n c e r c e l l s . L i f e S c i . , 6 8 : 2 0 2 5 - 2 0 3 6 . M o n t s e r r a t S o l e , N u r i a R i u s , A l i c i a F r a n c i a , L o r e n J G . 1 9 9 4 . L e t t e r s i n A p p l i e d M i c r o b i o l o g y . 1 9 : 3 4 1 - 3 4 4 . P e r e z - T o m a s R , M o n t a n e r B , L a l g o s t e r a E , S o t o - c e r r a t o V . 2 0 0 3 . T h e p r o d i g i o s i n s p r o a p o p t a t i c d r u g s w i t h a n t i c a n c e r p r o p e r t i e s . B i o c h e m . P h a r m o c o l . , 6 6 : 1 4 4 7 - 1 4 5 2 . N a i k e t a l . , 2 0 1 2 5 5 6 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7

P r y c e L H a d d i x , T e r r y F , W e r n e r . 2 0 0 0 . S p e c t r o p h o t o m e t r i c a s s a y o f g e n e e x p r e s s i o n : S e r r a t i a m a r c e s c e n s P i g m e n t a t i o n . 2 6 ( 4 ) : 3 - 1 3 . R u s t o m S M , V a l i o l l a h h e i d a r y n e j a d , A l k a M P , P r a f u l l a J D . 1 9 9 0 . I s o l a t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f S e r r a t i a m a r c e s c e n s m u t a n t s d e f e c t i v e i n p r o d i g i o s i n b i o s y n t h e s i s . C u r r . M i c r o b i o l . , 2 0 : 9 5 - 1 0 3 . S o t o - C e r r a t o V , L a l g o s t e r a E , M o n t a n e r B , S c h e f f e r G L , P e r e z - T h o m a s R . 2 0 0 4 . M i t o c h o n d r i a m e d i a t e d a p o p t o s i s o p e r a t i n g i r r e s p e c t i v e o f m u l t i d r u g r e s i s t a n c e i n b r e a s t c a n c e r c e l l s b y t h e a n t i c a n c e r a g e n t p r o d i g i o s i n . B i o c h e m . P h o r m o c o l . , 6 8 : 1 3 4 5 - 1 3 5 2 . S o l e M , F r a n c i a A , R i u s N , L o r e n J G . 1 9 9 7 . T h e r o l e o f p H i n t h e g l u c o s e e f f e c t o n p r o d i g i o s i n p r o d u c t i o n b y n o n p r o l i f e r a t i n g c e l l s o f S e r r a t i a m a r c e s c e n s . L e t t . A p p l . M i c r o b i o . , 2 5 : 8 1 - 8 4 . W e i J R , T s a i Y H , H o r n g Y T , S o o P C , H s i e h S C , H o S W , L a i H C . 2 0 0 5 . B i o c h e m i c a l c h a r a c t e r i z a t i o n o f R s s A - R s s B , a t w o c o m p o n e n t s i g n a l t r a n s u d u c t i o n s y s t e m r e g u l a t i n g s w a r m i n g b e h a v i o r i n S e r r a t i a m a r c e s c e n s . J . B a c t e r i o l . , 1 8 7 : 5 6 8 3 - 5 6 9 0 . W e i J R , T s a i Y H , H o r n g Y T , S o o P C , H s i e h S C , H s u e h P R , H o r n g J T , W i l l i a m s P , L a i H C . 2 0 0 6 . A m o b i l e q u o r u m - s e n s i n g s y s t e m i n S e r r a t i a m a r c e s c e n s . J . B a c t e r i o l . , 1 8 8 : 1 5 1 8 - 1 5 2 5 . Y u - H o n g W e i , W e i - C h u a n C h e n . 2 0 0 5 . E n h a n c e d p r o d u c t i o n o f P r o d i g i o s i n l i k e p i g m e n t f r o m S e r r a t i a m a r c e s c e n s S M A R b y m e d i u m i m p r o v e m e n t a n d o i l - s u p p l e m e n t a t i o n s t r a t e g i e s . J . B i o s c . B i o e n g . , 9 9 ( 6 ) : 6 1 6 - 6 2 2 . N a i k e t a l . , 2 0 1 2 J o u r n a l o f R e s e a r c h i n B i o l o g y ( 2 0 1 2 ) 2 ( 6 ) : 5 4 9 - 5 5 7 5 5 7 S u b m i t y o u r a r t i c l e s o n l i n e a t j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m A d v a n t a g e s E a s y o n l i n e s u b m i s s i o n C o m p l e t e P e e r r e v i e w A f f o r d a b l e C h a r g e s Q u i c k p r o c e s s i n g E x t e n s i v e i n d e x i n g Y o u r e t a i n y o u r c o p y r i g h t s u b m i t @ j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m w w w . j r e s e a r c h b i o l o g y . c o m / S u b m i t . p h p .